HCT-8人盲肠腺癌细胞实验操作步骤

细胞传代操作

当细胞密度达到80%-90%时即可进行传代。首先弃去旧培养基，用预热的PBS轻柔洗涤2次。加入适量0.25%胰蛋白酶（含EDTA），室温消化约1-2分钟。在倒置显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化。轻柔吹打细胞使其脱落，收集细胞悬液至离心管中，1000rpm离心5分钟。弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，按1:3至1:4比例接种于新培养瓶中，补充适量培养基使总体积保持一致。

细胞冻存与复苏

对于需要长期保存的细胞，建议在3-10代时进行冻存。配制冻存液（含10%DMSO的培养基），将离心后的细胞沉淀用冻存液重悬至5×10^6/mL密度。分装至冻存管中，采用梯度降温法：4℃30分钟→-20℃2小时→-80℃过夜，最后转入液氮长期保存。复苏时快速将冻存管置于37℃水浴中摇晃至融化，用预热的培养基稀释后离心去除DMSO，接种于培养瓶中。