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PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟及應用
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是一種基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine,PEI）的高性能基因轉(zhuǎn)染工具，通過陽離子聚合物與核酸的靜電結合實現(xiàn)高效、低毒的細胞內(nèi)基因遞送。核心原理：PEI分子富含氨基，在生理pH下帶正電荷，可與帶負電的DNA/RNA緊密結合形成納米復合物。該復合物通過細胞表面負電荷蛋白多糖吸附，經(jīng)胞吞作用進入細胞后，PEI的“質(zhì)子海綿效應”吸收溶酶體內(nèi)H?，導致溶酶體膨脹破裂，釋放核酸至細胞質(zhì)，從而實現(xiàn)基因表達。
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染步驟：
1、復合物制備：
稀釋核酸：將DNA/RNA（0.5~5μg）加入50~100μL無血清培養(yǎng)基中，輕柔混勻。
稀釋PEI：按優(yōu)化后的N/P比取PEI，加入等體積無血清培養(yǎng)基，渦旋1~2秒。
混合：將PEI溶液逐滴加入核酸溶液中，邊加邊渦旋，室溫靜置5~15分鐘（避免沉淀）。
2、轉(zhuǎn)染細胞：
吸去細胞培養(yǎng)基，更換為含低血清的培養(yǎng)基（如DMEM+0.5%FBS）。
將PEI-核酸復合物逐滴加入細胞中，輕晃培養(yǎng)板混勻。
3、培養(yǎng)條件：
瞬時轉(zhuǎn)染：4~6小時后更換為完q培養(yǎng)基（含10%~20%FBS），繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時檢測表達。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：48小時后添加選擇性培養(yǎng)基（如抗生素篩選），持續(xù)培養(yǎng)1~2周。
PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的應用場景：
1、重組蛋白生產(chǎn)：在HEK293和CHO細胞中高效表達抗體、病毒載體（如AAV）。
2、基因功能研究：通過過表達或敲低特定基因，研究其在細胞信號、疾病模型中的作用。
3、細胞治療開發(fā)：遞送CRISPR/Cas9等基因編輯工具，或轉(zhuǎn)染CAR基因制備CAR-T細胞。
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