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細胞培養(yǎng)系統(tǒng)在運行中，污染和增殖緩慢是較困擾研究者的兩大問題，需通過精準(zhǔn)排查找到根源并針對性解決。?
污染防控需建立全流程屏障。細菌污染常表現(xiàn)為培養(yǎng)基渾濁、pH驟降，此時應(yīng)立即丟棄污染細胞，用75%酒精消毒培養(yǎng)箱內(nèi)壁，更換濾膜和托盤水槽中的滅菌水。真菌污染多呈白色絮狀漂浮物，需用含氯消毒劑擦拭培養(yǎng)系統(tǒng)表面，并用紫外線照射培養(yǎng)箱30分鐘以上。支原體污染隱蔽性強，可通過PCR檢測確認，一旦發(fā)現(xiàn)需使用支原體清除劑處理，或直接更換新的細胞系，同時對所有耗材進行121℃高壓滅菌(至少20分鐘)。?
預(yù)防污染的關(guān)鍵在操作規(guī)范：穿戴無菌手套前需酒精消毒并自然晾干，避免手套接觸非無菌表面；開蓋操作時保持瓶口傾斜45°，遠離氣流擾動區(qū)；每批次培養(yǎng)基使用前需預(yù)留樣本培養(yǎng)48小時，確認無菌后方可大規(guī)模使用。?
細胞增殖緩慢需從環(huán)境與營養(yǎng)兩方面排查。若細胞形態(tài)無異常但增殖停滯，先檢查培養(yǎng)箱參數(shù)：CO?濃度應(yīng)穩(wěn)定在5%±0.1%，溫度保持37℃±0.5℃，濕度≥95%，可通過校準(zhǔn)設(shè)備確保參數(shù)精準(zhǔn)。營養(yǎng)不足也會導(dǎo)致增殖放緩，需核對培養(yǎng)基配方是否匹配細胞類型(如干細胞需添加特定生長因子)，血清濃度低于10%時可適當(dāng)提高至15%，同時每周更換2-3次培養(yǎng)基，避免代謝廢物積累。?
細胞自身狀態(tài)問題需針對性處理：傳代時胰酶消化過度會損傷細胞，應(yīng)嚴格控制消化時間(通常1-3分鐘)，出現(xiàn)細胞間隙增大即終止消化；細胞密度過高會導(dǎo)致接觸抑制，需及時傳代，保持接種密度在20%-30%；老化細胞會出現(xiàn)增殖能力下降，建議定期復(fù)蘇早期凍存的細胞株，避免長期傳代導(dǎo)致的特性改變。?
此外，培養(yǎng)器皿的選擇也會影響增殖效率：貼壁細胞需使用經(jīng)包被的培養(yǎng)瓶，懸浮細胞應(yīng)選用低吸附容器；新批次耗材需先進行小規(guī)模試用，確認無毒性后再批量使用。通過精細化環(huán)境管控，可顯著提升細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性，讓細胞培養(yǎng)系統(tǒng)真正成為可靠的研究工具。
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