一、背景

葉酸測(cè)定培養(yǎng)基用于樣品中葉酸測(cè)定，是利用干酪乳桿菌ATCC7469對(duì)樣品中的葉酸含量進(jìn)行微生物法測(cè)定。方法的測(cè)試菌株為干酪乳桿菌ATCC7469。葉酸培養(yǎng)基含有干酪乳桿菌生長(zhǎng)所必需的除葉酸外所有營(yíng)養(yǎng)成分。而葉酸是干酪乳桿菌ATCC7469生長(zhǎng)所必需的B族維生素。

配方(g/L)：酸水解酪蛋白：10.0；葡萄糖：40.0；乙酸鈉：40.0；磷酸二氫鉀：1.0；磷酸氫二鉀：1.0；DL-色氨酸 ：0.2；L-胱氨酸鹽酸鹽：0.5；腺嘌呤 ：0.01；鳥(niǎo)嘌呤鹽酸鹽：0.01；尿嘧啶：0.01；黃嘌呤：0.02；吐溫80：0.1；還原型谷胱甘肽：0.005；無(wú)水硫酸鎂：0.2；氯化鈉：0.02；硫酸亞鐵：0.02；硫酸錳：0.015；核黃素：0.001；對(duì)氨基苯甲酸：0.002；鹽酸吡哆醇：0.004；鹽酸硫胺素：0.0004；泛酸鈣：0.0008；生物素：0.00002；pH6.7±0.125℃。

二、用法

1、用100ml去離子水重懸9.4g本產(chǎn)品，加入50mg抗壞血酸。

2、混合均勻，分裝時(shí)使沉淀均勻分布。每個(gè)測(cè)定試管中分裝5ml。

3、加入標(biāo)準(zhǔn)樣或待測(cè)樣。用去離子水定容至10ml。

4、121°C滅菌5min。立即冷卻。

三、應(yīng)用

用于微孔板法測(cè)定乳粉中葉酸的含量研究：

葉酸其實(shí)是B族維生素中的一種,它是人體健康中的部分,所以葉酸的每日葉酸攝取量和葉酸的測(cè)定方法及其毒理學(xué)作用的研究都是現(xiàn)如今研究的熱門(mén)話題,而且葉酸的測(cè)定方法是研究這些問(wèn)題的基礎(chǔ)和前提,所以葉酸的檢測(cè)方法則變得特別重要。如何準(zhǔn)確測(cè)出葉酸的含量就是衡量檢測(cè)方法好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。

微生物法是測(cè)定葉酸的常用方法,可以準(zhǔn)確的檢測(cè)出具有生化活性的葉酸,結(jié)果表示出的是基體中的葉酸含量,這也是微生物測(cè)定法不同于其他的檢測(cè)方法的的優(yōu)點(diǎn),是儀器測(cè)定方法難以達(dá)到的?，F(xiàn)在大部分國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法都將微生物檢測(cè)法當(dāng)做多種維生素檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。

在我國(guó)現(xiàn)在實(shí)行的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)里也仍然用微生物方法檢測(cè)乳制品和嬰幼兒配方食品中的葉酸。酪乳酸桿菌（ATCC 7469）相對(duì)葉酸有的特異性,葉酸作為該菌必需的生長(zhǎng)因子,而且在一定的生長(zhǎng)環(huán)境下,該菌生長(zhǎng)和增殖的速率與體系中葉酸的含量具有一定的比例關(guān)系,微生物法則是依據(jù)這個(gè)原理對(duì)葉酸定量分析的。

微生物法的檢測(cè)過(guò)程一般會(huì)分為以下六個(gè)檢測(cè)步驟:1)工作菌懸液的制備;2)檢測(cè)樣品和工作標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備;3)測(cè)試培養(yǎng)基的制備,現(xiàn)在可以應(yīng)用成品培養(yǎng)基;4)滅菌及接種和培養(yǎng);5)樣品測(cè)定,主要方法是光密度法;6)計(jì)算。本文基于對(duì)微生物方法的原理和基本的分析步驟制定了微孔板的測(cè)定方法,通過(guò)對(duì)十組的未知濃度的樣品重復(fù)五次測(cè)定,得到樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均<2%;通過(guò)的已知濃度樣品的測(cè)定,得出實(shí)驗(yàn)的相對(duì)誤差<2%;實(shí)驗(yàn)的回收率范圍為98%-106%;線性的相關(guān)系數(shù)也可以達(dá)到0.9995以上；

同次實(shí)驗(yàn)的平行孔間的變異系數(shù)也都<5%。所以,微孔板法可以用來(lái)準(zhǔn)確的測(cè)定乳粉中葉酸的含量,并且相比較傳統(tǒng)的試管方法,可以大量的縮短實(shí)驗(yàn)的操作時(shí)間,降低實(shí)驗(yàn)的難度,同時(shí)節(jié)約了實(shí)驗(yàn)成本。

微孔板法的優(yōu)勢(shì)在于成本少、靈敏度高、適用于數(shù)量大的樣品測(cè)定、可操作性強(qiáng);隨著當(dāng)代的科技迅速發(fā)展,很多的儀器檢測(cè)方法都被開(kāi)發(fā)出來(lái),用以檢測(cè)低含量的葉酸食品。

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