使用奥林巴斯正置荧光显微镜 CX33 观察大肠杆菌，通常需先对大肠杆菌进行荧光染色，再按规范操作显微镜进行观察，具体步骤如下：

样品准备

培养大肠杆菌：将大肠杆菌接种到适宜的培养基中，如 LB 培养基，在 37℃恒温培养箱中培养至对数生长期，一般培养时间为 6-8 小时左右。

染色：根据观察目的选择合适的荧光染料。若观察大肠杆菌的 DNA，可使用 DAPI 染料；若观察特定蛋白，可使用与相应抗体结合的荧光染料。例如用 DAPI 染色时，取少量菌液于载玻片上，滴加适量 DAPI 染液，染色 5-10 分钟。

制片：染色结束后，盖上盖玻片，尽量避免产生气泡。若菌液过多，可用吸水纸吸去多余液体。

显微镜操作

放置与检查：将显微镜平稳放置在实验台上，置于身体前方略偏左位置。检查显微镜各部件是否完好，目镜、物镜是否清洁，调焦旋钮、载物台移动旋钮等能否正常操作，光源是否能正常发光。

放置装片：打开载物台的夹具，将制作好的装片平稳放置在载物台上，使样品位于通光孔的正中央，然后轻轻夹紧装片。

选择物镜：先使用低倍物镜（如 4× 或 10×）进行初步观察，便于快速找到样品并确定观察区域。

调节光源：开启显微镜电源开关，通过亮度调节旋钮将光源亮度调至适中，开始时可将亮度调得稍低，再根据观察情况调整。

调节聚光器和孔径光阑：调节聚光器的高度，使光线集中照射在样品上。根据样品特性和观察需求调整孔径光阑大小，低倍观察时可适当开大，高倍观察时应缩小，以获得合适的对比度和分辨率。

粗调对焦：转动粗调焦旋钮，使镜筒缓慢下降，同时从侧面观察物镜与装片的距离，直到物镜接近装片但不接触。然后通过目镜观察，反向转动粗调焦旋钮，使镜筒缓慢上升，直到看到模糊的图像。

微调对焦：使用微调焦旋钮，对图像进行精细调节，使图像达到最清晰状态。

转换高倍物镜：若需要更详细地观察细节，在低倍物镜下将感兴趣的区域调整到视野中心后，转动物镜转换器，更换高倍物镜（如 40× 或 100×），更换后通常只需微调焦旋钮即可使图像再次清晰。

荧光观察与记录

选择荧光滤光片：根据所使用的荧光染料，选择相应的荧光滤光片。例如观察 DAPI 染色的大肠杆菌，需选择适合 DAPI 激发和发射波长的滤光片。

观察荧光图像：通过目镜观察大肠杆菌的荧光图像，调整光源亮度、焦距等，使荧光信号清晰可见。注意观察荧光的分布、强度等特征。

图像采集：如果显微镜配备了成像系统，将其与显微镜正确连接，并打开相应的成像软件。调整成像软件中的参数，如曝光时间、增益等，以获得最佳的荧光图像效果，然后点击拍摄按钮，获取图像并保存。