百歐博偉生物：植物組織培養(yǎng)中外植體的消毒是一個關(guān)鍵步驟，直接影響培養(yǎng)的成功率。以下是詳細(xì)的消毒步驟和注意事項：

一、外植體預(yù)處理

1、清洗：用自來水沖洗外植體，去除表面泥土和雜質(zhì)。對多毛或蠟質(zhì)層較厚的組織，可加入少量洗潔精浸泡10-15分鐘，增強(qiáng)消毒劑滲透。

2、切割：將外植體切成適宜大?。ㄈ缛~片切成0.5-1 cm2），增加消毒劑接觸面積。操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，工具需滅菌。

二、常用消毒劑及步驟

1、70%乙醇：浸泡30秒至1分鐘，快速滅殺表面微生物。適用于大多數(shù)外植體，但對幼嫩組織需縮短時間。

2、次氯酸鈉（NaClO）：濃度5-10%（商用漂白液稀釋），浸泡10-20分鐘。分解后釋放氯氣殺菌，需無菌水沖洗3-5次。適用于莖段、種子等較硬組織。

3、雙氧水（H?O?）：3-10%濃度浸泡5-15分鐘，分解為水和氧氣，無殘留。適用于種子或內(nèi)部有空隙的組織。

4、其他消毒劑：（HgCl?，0.1%濃度）因毒性強(qiáng)已少用，必要時需嚴(yán)格處理廢液。

三、特殊處理

1、內(nèi)生菌問題：若外植體內(nèi)部帶菌，可在培養(yǎng)基中添加抗生素（如頭孢霉素50-100 mg/L），但需測試對植物生長的影響。

2、復(fù)雜外植體：如塊莖或果實，可結(jié)合酒精擦拭表面后二次消毒。

四、無菌操作要點

1、超凈工作臺：全程在無菌環(huán)境下操作，使用前紫外線滅菌30分鐘。

2、工具滅菌：鑷子、解剖刀等需高溫高壓滅菌或火焰灼燒冷卻后使用。

3、無菌水沖洗：每次消毒后至少沖洗3次，去除殘留消毒劑。

五、污染控制與優(yōu)化

1、污染觀察：接種后2-7天密切觀察，若污染率高需調(diào)整消毒時間或濃度。

2、存活率平衡：幼嫩組織（如葉片）可縮短次氯酸鈉處理至5-10分鐘；堅硬組織（如種子）可延長至20分鐘。

3、預(yù)處理優(yōu)化：對帶絨毛外植體，乙醇預(yù)處理時間延長至1-2分鐘，增強(qiáng)次氯酸鈉滲透。

六、注意事項

1、個體差異：不同植物種類、位對消毒耐受性不同，需預(yù)實驗確定條件。

2、環(huán)境因素：野外采集樣本需更嚴(yán)格消毒（如兩次次氯酸鈉處理），溫室材料可適當(dāng)減少步驟。

3、安全防護(hù)：操作有毒消毒劑時穿戴手套、護(hù)目鏡，避免直接接觸。

示例流程（以葉片為例）

自來水沖洗葉片30分鐘，軟毛刷輕刷表面。

70%乙醇浸泡40秒，無菌水沖洗1次。

5%次氯酸鈉溶液浸泡12分鐘，期間輕輕搖動。

無菌水沖洗5次，置于滅菌濾紙上吸干水分。

接種至培養(yǎng)基，25℃暗培養(yǎng)3天后觀察污染情況。

通過系統(tǒng)優(yōu)化消毒方案，可顯著提高外植體存活率并降低污染風(fēng)險，為后續(xù)愈傷組織誘導(dǎo)或再生培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)。

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