有許多方法適用于定量樣品中核酸的數(shù)量，但紫外-可見(jiàn)光吸光度法是確定樣品中 DNA 或 RNA 濃度和純度的主要方法。

單鏈和雙鏈 DNA 都強(qiáng)烈吸收峰值吸光度波長(zhǎng)為 260nm 的紫外線(xiàn)。簡(jiǎn)單的濃度和純度測(cè)量涉及直接以微量方法或包含在塑料或玻璃比色皿中穿過(guò)樣品的光譜。根據(jù) Beer-Lambert 定律，光穿過(guò)樣品的衰減與濃度和光穿過(guò)樣品的距離成正比

DNA 可以吸收亞可見(jiàn)光譜上光的目標(biāo)物質(zhì)。各種蛋白質(zhì)的芳香族氨基酸和核糖核酸 （RNA） 都吸收大約 260 – 280nm 的光。鑒于難以確保樣品的絕對(duì)純度，樣品可能含有各種可能導(dǎo)致紫外吸光度的污染物。這可能會(huì)導(dǎo)致高估樣品中 DNA 的濃度。評(píng)估這些污染物對(duì)測(cè)量影響的純度比用于識(shí)別潛在的樣品問(wèn)題。

紫外-可見(jiàn)分光光度法的工作原理

紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)配備了一個(gè)或多個(gè)入射光源通道，覆蓋了整個(gè)紫外-可見(jiàn) （UV-Vis） 電磁光譜 （190 – 840nm）。分析人員使用特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光脈沖選擇性地詢(xún)問(wèn)分離的樣品。紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器實(shí)時(shí)獲取樣品的透射光譜，從而獲得樣品總光譜輸出的高分辨率測(cè)量值。這種分辨率和測(cè)量準(zhǔn)確度對(duì)于根據(jù)目標(biāo)分析物的光譜指紋圖譜定量目標(biāo)分析物至關(guān)重要。

使用 DeNovix 對(duì) DNA 進(jìn)行紫外-可見(jiàn)光定量

DeNovix 一直參與超微量技術(shù)的開(kāi)發(fā)，他們的執(zhí)行官曾是 NanoDrop™ Technologies Inc. 的創(chuàng)始合伙人兼總裁。此后，DeNovix 開(kāi)發(fā)了紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)之一，具有很高的精度和市場(chǎng)上最寬的動(dòng)態(tài)范圍。