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尺寸排阻色譜柱也是需要清洗的

來源:廣州綠百草科學(xué)儀器有限公司   2025年06月19日 10:40  
  尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具,其工作原理主要基于分子大小差異進(jìn)行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來實(shí)現(xiàn)分離。具體來說,聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選,較大的分子無法通過尺寸較小的孔道,只有較小的分子才能通過這些孔道,從而實(shí)現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點(diǎn)在于其分離速度快、操作簡(jiǎn)單、分離效果好。此外,該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì),因此適用于各種生物大分子,如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。
  尺寸排阻色譜柱的清洗步驟
  1、判斷清洗時(shí)機(jī):隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加,出現(xiàn)柱效下降無法達(dá)到分離要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情況時(shí),就需要清洗色譜柱。
  2、反向連接與沖洗:建議清洗過程中將色譜柱與檢測(cè)器斷開連接,防止流通池污染。反向連接色譜柱,并以最大流速的1/2運(yùn)行色譜柱。
  3、具體清洗流程:使用5倍柱體積(CV)的pH3.0、0.5mol/L Na?SO?水溶液沖洗色譜柱;使用5CV的Milli-Q或去離子水沖洗;使用5CV的20%乙腈清洗;再使用5CV的Milli-Q或去離子水沖洗。
  4、正向連接與平衡:清洗完成后,再正向連接色譜柱,并以樣品分析時(shí)的流速使用至少10CV的流動(dòng)相來平衡色譜柱,應(yīng)逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。

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