黄尿酸（xanthurenic acid）ELISA试剂盒（竞争法）的原理与应用是什么？

黄尿酸（xanthurenic acid）ELISA试剂盒（竞争法）的原理与应用可总结如下：

一、检测原理

采用竞争法酶联免疫吸附技术，预先包被黄尿酸抗原的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的竞争抗原，经温育洗涤后，通过TMB显色反应（蓝色→黄色）实现检测。样本中黄尿酸浓度与颜色深度呈负相关，最终通过测定450nm处OD值计算浓度.

二、样本处理与保存

1. ?样本类型?：支持血清、血浆、唾液、尿液等。

2. ?处理方法?：

• 血清需避免细胞刺激，3000rpm离心10分钟分离；

• 其他液体样本需去除杂质后分装冻存（-20℃或-80℃）。

五、注意事项

1. ?保存条件?：未开封试剂盒需避光保存于2-8℃，开封后需按组分要求分装；

2. ?适用性验证?：建议预实验确认样本稀释比例及检测线性范围；

3. ?检测灵敏度?：竞争法通常灵敏度为10-50pg/mL，需结合超灵敏试剂盒（如化学发光法）检测低浓度样本。

文献支持：

The Gut Microbiota-Xanthurenic Acid-Aromatic Hydrocarbon Receptor Axis Mediates the Anticolitic Effects of Trilobatin

影响因子：17.521

结果判断 

1. 15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值； 

2. 百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率 计算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3. logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4. 将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除，为标准点的百分结合率，在log-logit坐标纸上绘图。 

5. Log-logit双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位，第二个1-9表示 为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比（1-99），即各标准吸光值的百 分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样 品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即 为样品的浓度，无须换算。 

6. 人工处理：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横 坐标，对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样品 的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是最后的浓度 值。 

7.8. 9. 自动处理：使用logit-log或四参数数据处理模式，由电脑自动计算得出结果。 敏感度：0.1 PPb。

试剂盒性能 

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。

2. 灵敏度：检测浓度小于 0.1 PPb。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。