ZETA LIFE如何高效率转染RAW264.7细胞

1. 细胞接种：提前 1 天将细胞接种到培养板，如 6 孔板，使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培养基，且培养基中不加双抗，使转染时细胞汇合度达到 60%-80% 左右。

2. 质粒准备：使用无内毒素提取试剂盒提取质粒，将其溶解于无菌双蒸水或超纯水中，保证质粒浓度在 500 - 700ng/ul 左右。

3. 复合物制备：将质粒 DNA 与 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合，例如 12ug 质粒对应 12ul 转染试剂，用移液器吹吸 10 - 15 次混匀，室温静止 10 - 15 分钟。

4. 转染细胞：将复合物加入含有(血清)细胞培养基的细胞培养板中，并轻轻混匀，放入 37℃、5% CO?培养箱中继续培养。

5. 细胞换液：转染 24 小时后对细胞进行正?；灰?。

6. 结果分析：对于质粒 DNA 转染，在转染 48 - 72 小时后，通过荧光检测来评估转染效率；在 48 - 96 小时后，检测 mRNA 或蛋白的表达情况。如果要进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后 24 - 48 小时左右，加入适量的药物进行筛选操作。