人生长分化因子15(GDF15)ELISA试剂盒技术解析与应用指南
上海仁捷生物科技有限公司
摘要
人生长分化因子15(Growth Differentiation Factor 15,GDF15)是一种重要的细胞应激反应蛋白,在多种病理生理过程中发挥关键作用。本文详细介绍了上海仁捷生物科技有限公司自主研发的GDF15 ELISA试剂盒的技术原理、性能参数、操作流程及典型应用案例,为研究人员提供全面的技术参考。
1. 产品概述
1.1 GDF15生物学意义
GDF15属于TGF-β超家族成员,又称MIC-1(macrophage inhibitory cytokine-1),具有以下重要功能:
调控能量代谢平衡
参与炎症反应
影响肿瘤发生发展
与心血管疾病密切相关
1.2 上海仁捷GDF15 ELISA试剂盒特点
高灵敏度:检测下限达10 pg/mL
宽检测范围:50-1600 pg/mL
优异特异性:不与TGF-β家族其他成员交叉反应
稳定可靠:批内变异系数<8%,批间变异系数<10%
多种样本适用:血清、血浆、细胞培养上清等
2. 技术原理
2.1 双抗体夹心ELISA原理
本试剂盒采用经典双抗体夹心法:
包被:高亲和力抗GDF15单抗预包被于微孔板
结合:样本中GDF15与包被抗体特异性结合
检测:加入生物素标记的二抗
信号放大:链霉亲和素-HRP复合物结合
显色:TMB底物显色反应
2.2 检测系统优化
抗体配对:经过严格筛选的高效抗体对
信号放大:生物素-亲和素放大系统
干扰控制:特殊缓冲体系降低基质效应
3. 实验操作指南
3.1 样本处理建议
样本类型 | 处理方法 | 注意事项 |
---|---|---|
血清 | 室温凝固30min后,2000×g离心15min | 避免溶血 |
血浆 | EDTA抗凝,离心去除血小板 | 及时分离 |
细胞上清 | 0.22μm滤膜过滤 | 避免反复冻融 |
3.2 标准操作流程
试剂准备(室温平衡30min)
加样(标准品/样本各100μL)
37℃孵育90min
洗板(自动洗板机推荐)
加检测抗体(100μL/孔)
37℃孵育60min
洗板
加酶结合物(100μL/孔)
37℃孵育30min
洗板
显色(TMB,15min)
终止反应
450nm读数
3.3 数据分析
四参数拟合标准曲线
质控要求:R2≥0.99
推荐使用专业ELISA分析软件
4. 典型应用案例
4.1 心血管疾病研究
案例:急性心肌梗死患者血清GDF15动态监测
方法:收集50例AMI患者发病后0、6、12、24、48h血清样本
结果:GDF15水平在发病6h显著升高,与心肌损伤程度正相关(r=0.72)
4.2 肿瘤研究
案例:结直肠癌患者预后评估
方法:检测120例患者术前血清GDF15水平
结果:高GDF15组(>200pg/mL)5年生存率显著低于低水平组(38% vs 72%)
4.3 代谢性疾病研究
案例:2型糖尿病肥胖患者干预研究
方法:检测生活方式干预前后GDF15变化
结果:有效减重组GDF15下降幅度显著(P<0.01)
5. 常见问题解决方案
5.1 技术问题排查
问题现象 | 可能原因 | 解决方案 |
---|---|---|
标准曲线不佳 | 标准品溶解不充分 | 充分震荡混匀 |
背景值高 | 洗板不充分 | 增加洗涤次数 |
重复性差 | 操作不一致 | 统一操作手法 |
5.2 结果解读要点
注意样本采集时间(昼夜节律影响)
考虑药物干扰(如二甲双胍可升高GDF15)
结合临床其他指标综合分析
6. 产品服务支持
6.1 上海仁捷特色服务
免费技术咨询:专业团队提供实验设计指导
方法学验证服务:协助完成方法学比对
定制化服务:可根据需求调整检测范围
关键词:GDF15、ELISA试剂盒、上海仁捷生物、心血管标志物、肿瘤标志物、代谢调控
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