微生態(tài)活菌制品系由人體正常菌群成員或具有促進正常菌群生長和活性作用的無害外籍細菌，經(jīng)培養(yǎng)、收集菌體、干燥成菌粉后，加入適宜輔料混合制成。用于預防和治療因菌群失調(diào)引起的相關癥狀和疾病。

微生態(tài)活菌制品必須由非致病的活菌組成，無論在生產(chǎn)過程、制品貯存和使用期間均應保持穩(wěn)定的活菌狀態(tài)。它可由一株、多株或幾種細菌制成單價或多價聯(lián)合制劑。根據(jù)其不同的使用途徑和方法可制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑等多種劑型。

一、基本要求

微生態(tài)活菌制品的制備方法、工藝應能保證成品含有足夠的活菌數(shù)量，保持其穩(wěn)定性，同時應防止外源因子的污染。

生產(chǎn)和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。

二、制造

（一）生產(chǎn)用菌種

生產(chǎn)用菌種應符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)定”的有關規(guī)定。

1、名稱及來源

選用的生產(chǎn)用菌種應來自人體內(nèi)正常菌群，或?qū)θ梭w無毒無害、具有促進正常菌群生長和活性作用的外籍細菌。細菌的分離過程和傳代背景應清晰，應具備穩(wěn)定的生物學和遺傳學特性，并能保持穩(wěn)定的活菌狀態(tài)，經(jīng)實驗室和臨床試驗證明安全、有效。

2、種子批的建立

菌種的屬、種型分類鑒定，應依據(jù)版伯杰氏細菌系統(tǒng)鑒定手冊（Bergry’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏細菌命名手冊（Bergry’s Manual of Determinative Bacteriology）的有關規(guī)定進行，包括形態(tài)、生長代謝特性檢查。原始種子或主種子還應做遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。

三級種子批常規(guī)檢查包括以下3項：

（1）培養(yǎng)特性及染色鏡檢    

將菌種接種于適宜培養(yǎng)基，置有氧或厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，觀察其生長情況，確定菌種為需氧性細菌或厭氧性細菌；以劃線法觀察在瓊脂平皿上生長的單個菌落的形狀、大小、表面、邊緣、透明度、色澤等特征；也可觀察菌種在不同溫度、pH或不同濃度的氯化鈉溶液等條件下的生長特性等。

取菌種的新鮮培養(yǎng)物涂片做革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體的染色反應、形態(tài)、大小和排列等，有芽孢的細菌應同時觀察芽孢的形狀、大小和位置（也可增做芽孢染色）。檢查結果均應符合原始菌種的特性。

（2）生化反應    

按附錄ⅪⅤ“細菌生化反應培養(yǎng)基”選擇相應的培養(yǎng)基或其他適宜的方法進行，結果應符合原始菌種的特性。

（3）毒性試驗    

毒性試驗是通過動物試驗檢查菌種是否存在不安全因素，以保證人體使用安全。

用體重18～22g小鼠5只，每只腹腔注射0.3ml新鮮菌液（不少于1.0×109CFU/0.3ml）,連續(xù)觀察3天，小鼠均應健康存活、體重增加；或每只小鼠經(jīng)口灌胃0.5ml新鮮菌液（不少于1.0×109CFU/0.5ml），每天1次，連續(xù)3天，從第1天灌胃起連續(xù)觀察至第7天，小鼠均應健康存活、體重增加。

除另有規(guī)定外，原始種子或主種子批還需進行以下檢查：

（1）細菌代謝產(chǎn)物——脂肪酸測定    

照氣相色譜法（附錄Ⅲ Ｃ）或其他適宜的方法進行，應符合該菌種的特性。

（2）遺傳特性分析    

可采用細菌DNA的G+Cmol%的含量測定或其他適宜方法進行，應符合該菌種的遺傳特性。

（3）抗生素敏感性試驗   

采用瓊脂擴散紙片法或其他適宜方法進行菌株的抗生素敏感性檢查，應符合該菌種的特性。

（4）穩(wěn)定性試驗    

菌種在適宜培養(yǎng)基中，連續(xù)傳代30代次后，將第30代培養(yǎng)物作種子批檢定，全部檢查結果應與原始菌種的特性一致。

4、種子批的保存

原始種子和主種子應凍干保存于8℃以下，工作種子應置于適宜溫度保存。

（二）菌粉制造

應包括種子液制備、大罐培養(yǎng)、收獲菌體（或芽孢）和菌體干燥制成菌粉。如生產(chǎn)多價制品時，應每種菌分別培養(yǎng)，制備單價菌粉。

1、生產(chǎn)用種子

啟開工作種子批菌種，接種于適宜培養(yǎng)基進行多級種子擴增，應涂片做革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察5～10個視野，細菌的染色反應、形態(tài)應一致并符合原始菌種的特征。制備過程應防止污染，菌種傳代次數(shù)應符合規(guī)定。

2、生產(chǎn)用培養(yǎng)基

采用經(jīng)批準的培養(yǎng)基用于生產(chǎn)。

3、培養(yǎng)

采用液體培養(yǎng)。將種子液置適宜條件下培養(yǎng)（包括厭氧或需氧、溫度、時間等），培養(yǎng)過程中取樣涂片做革蘭氏染色鏡檢、pH值檢測等，芽孢菌需進行芽孢形成率的檢測，均應符合規(guī)定。培養(yǎng)結束后取樣做純菌檢查，如發(fā)現(xiàn)污染應予廢棄。

生產(chǎn)多價制品的單價菌粉時，應分別培養(yǎng)。

4、收獲菌體和制成菌粉

培養(yǎng)結束后離心收獲濕菌體，與適宜的分散劑、穩(wěn)定劑混合。采用真空冷凍干燥法干燥菌體，芽孢菌可采用加熱干燥方法，再經(jīng)粉碎、過篩制成粉末狀菌粉。

5、菌粉的保存及有效期

應通過活菌穩(wěn)定性試驗確定保存溫度和有效期。

6、菌粉檢定

按“菌粉檢定”項進行，符合規(guī)定后方可進行半成品配制。

（三）半成品

1、配制

同一工作種子批菌種生產(chǎn)的最多2批單價菌粉可按批準的比例與輔料混合均勻后制成半成品。配制多價制品時，應將各單價菌粉、輔料按配方比例和配制程序混合均勻，配制過程應防止污染。

2、半成品檢定

按“半成品檢定”項進行，應符合規(guī)定。

（四）成品

1、劑型制備

根據(jù)制品的用途、使用對象和用藥途徑等因素確定劑型。制備過程應符合附錄Ⅰ“制劑通則”項下相關劑型的規(guī)定。

2、分批

成品批號應在半成品配制后確定，配制日期即為生產(chǎn)日期。同一批號的制品，應來源一致、質(zhì)量均一，按規(guī)定要求抽樣檢驗后，能對整批制品作出評定。應根據(jù)驗證結果，規(guī)定半成品的分裝時間，如超過24小時，應分為不同的亞批。

3、分裝、規(guī)格和包裝

制品的分裝應符合附錄Ⅰ“制劑通則”的有關規(guī)定。包裝應符合“生物制品包裝規(guī)程”的有關規(guī)定。規(guī)格應符合批準的規(guī)格要求。

三、檢定

微生態(tài)活菌制品質(zhì)量檢定應包括菌粉檢定、半成品檢定和成品檢定。

（一）菌粉檢定

1、外觀

應為白色、灰白色或灰黃色粉末。

2、目的菌檢查

取少量菌粉加入適量，滅菌生理氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液后，涂布在適宜瓊脂平皿上，在適宜條件下培養(yǎng)，其培養(yǎng)物的生長特性和染色鏡檢的特征應符合生產(chǎn)用菌種特征。

3、雜菌檢查

方法和結果判斷見本總論附錄3。如不符合規(guī)定應廢棄。

4、干燥失重

菌粉中殘余水分的含量會直接影響活菌的生存，須進行菌粉干燥失重的檢查。應按附錄Ⅶ Ｌ或儀器方法測定。

5、活菌數(shù)測定

測定每克菌粉中含有的活菌數(shù)量。方法見本總論附錄2。

（二）半成品檢定

半成品須做雜菌檢查，根據(jù)用藥途徑確定雜菌檢查的質(zhì)控指標。方法和結果判斷見本總論附錄3。

（三）成品檢定

1、鑒別試驗

檢查成品中所含的目的菌是否符合生產(chǎn)用菌種的特性。即按上述“種子批的檢定”方法進行生長特性、染色鏡檢和生化反應檢查，應符合規(guī)定。對于多價制品，則須逐一檢查單價菌特性。

2、理化檢查

（1）外觀  

根據(jù)劑型，觀察制品的外觀、色澤。

片劑外觀應完整、光潔，呈白色或類白色，間有菌粉色斑；顆粒劑、散劑和膠囊劑內(nèi)粉末的粒子大小、色澤應均勻，間有菌粉色斑。

（2）干燥失重  

按附錄Ⅶ Ｌ或儀器方法測定，減失重量應不得超過5.0%，芽孢菌制品應不得超過7.0%。

（3）粒度  

散劑和顆粒劑應進行粒度檢查。

按附錄ⅤＧ第二法，采用單篩分法或雙篩分法檢查，應符合規(guī)定。

（4）裝量（重量）差異  

各劑型按附錄Ⅰ“制劑通則”的相應規(guī)定進行，應符合規(guī)定。

（5）崩解時限  

膠囊劑、片劑按附錄ⅤＣ進行，應符合規(guī)定。

3、活菌數(shù)測定

按本總論附錄2方法測定每克制品中的活菌數(shù)，應符合規(guī)定。多價制品應分別測定各單價活菌數(shù)。

4、雜菌檢查

目的是檢查成品中外源微生物的污染情況，以保證人體使用安全。

方法和結果判斷與半成品的“雜菌檢查”項相同。

5、安全試驗

安全試驗是通過動物試驗進行的非特異性毒性檢查，應根據(jù)制品的使用途徑和人用劑量確定試驗方法。

（1）腸道微生態(tài)活菌制品檢查  稱取2g制品，加入8ml生理氯化鈉溶液中，混合均勻。用5只體重18～22g小鼠，每只小鼠經(jīng)口灌胃0.5ml，每天1次，連續(xù)3天。自第1天灌胃起，連續(xù)觀察7天，小鼠應健康存活、體重增加，判為合格。如不合格，可另選10只小鼠復試1次，判定標準同前。

（2）陰道微生態(tài)活菌制品檢查  用24～26g雌性小鼠5只，，每只小鼠陰道內(nèi)置入10mg制品，每天1次，連續(xù)3天。自給藥天起，連續(xù)觀察7天，小鼠應健康存活、體重增加，陰道局部無紅腫、分泌物等癥狀，判為合格。

四、保存、運輸及有效期

按批準的溫度保存和運輸。自生產(chǎn)之日起，按批準的有效期執(zhí)行。

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