做Western Blot杂带多?免疫荧光背景像星空?ELISA检测总翻车?
别急着怀疑自己的手!可能是你的抗体没选对!
今天手把手教你避坑,轻松get靠谱抗体选择技巧!
?【选抗体必看3步法】
??Step 1:明确靶标
?? 了解待测靶标:在uniprot查询待测蛋白信息,包括名称、分子量、阳性组织/细胞种类、亚细胞定位等。
??实验应用目的:研究靶蛋白细胞定位可选IHC/IF;研究靶蛋白是表达或定量可选WB,ELISA。
??实验样本:明确实验样本,选择合适的阳性对照。
??Step 2:了解抗体信息
?? 抗体名称(Antibody name): 含靶蛋白名称,磷酸化抗体含磷酸化位点;
??抗体货号(Catalog number): 抗体独*无*标记,相同货号抗体也会有不同批次号,如需重复实验的,选同一批号抗体。
??宿主(Host): 抗体来源物种,常见有Rabbit, Mouse, Human,等,避免选择与样本物种相同来源的抗体,防止同源高背景。
??克隆类型(Clonality): 多克?。≒olyclonal)多抗原表位,亲和性高,有利信号放大,适用表达水平低和抗原微小修饰的检测;单克隆(Monoclonal)单一抗原表位,特异性高,批次一致性高,适用要求高特异性和重复实验的研发。
??检测应用 (Tested applications): 抗体检测过的实验类型比如WB, IHC,ELISA等,根据实验需要选择。
??反应物种(Reactivity): 抗体检测过的物种,确保里面包含待测样本的物种。
??免疫原(Immunogen): 包含多肽和重组蛋白,多肽片段短,获得的抗体特异性一般没有重组蛋白作为免疫原的高,比较抗体免疫原的Uniprot ID信息,是否是你要测的目的蛋白。
??抗体检测结果图:非常重要,根据抗体检测结果可以分辨抗体的特异性和物种适应性,有些抗体还提供敲除/敲低样本验证图,多物种交叉反应数据的更优。
??其他考虑因素:抗体价格或货期,售后服务有保障。
??Step 3:小样测试
??购买小规格进行小样测试;
??建议先跑阳性对照,摸索**抗体稀释比例。
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