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分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～380nm的紫外光區(qū)，(2)380～780nm的可見光區(qū)，(3)2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。
儀器組成
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。
光譜范圍
包括波長范圍為400~760nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙，黃綠，藍靛，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。
物質(zhì)的吸收光譜：
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜，它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。
不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。
當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時透過的光的強度減弱，因為有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過溶液。
入射光=反射光+分散光+吸收光+透過光。
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的損失則：
入射光=吸收光十透過光
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