细胞钾离子（potassium ion）浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

  细胞钾离子（potassium ion）浓度荧光定量检测试剂盒是一种旨在通过钾离子敏感性荧光探针PBFI，与钾离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定样品中总钾离子浓度的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体细胞裂解悬液样品中总钾离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

技术背景

钾离子（potassium ion；K）是人体中的一种重要电介质和矿物质，尤其是细胞内和细胞外基质中的重要阳离子。其功能在于维持细胞内外的酸碱平衡、渗透压、膜电位、神经肌肉功能等。血钾增高，即高血钾症（hyperkalemia）与肾衰、脱水性休克、肾上腺皮质功能不全有关；而血钾降低，即低钾血症（hypokalemia）与营养不良、负氮平衡、胃肠道液体流失等有关。正常人体的血钾浓度范围狭窄，在3至6毫摩尔。钾的检测包括化学沉淀法、离子选择性电位分析法（ion selective potentiometry；ISP）、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到其它金属元素的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。钾结合性苯并呋喃间苯二甲酸（potassium binding benzofuran isophthalate；PBFI），是苯并呋喃间苯二甲酸衍生物，其荧光基团与重氮冠醚（diazocrown ether）的氮分子链接，产生相应配体的选择性，一旦与钾离子结合，其荧光强度迅速增强，可以敏感测定游离钾离子水平。在荧光分光光度仪下，激发波长340至380nm，散发波长450至550nm，来定量测定的钾离子浓度。

产品内容

  清理液（Reagent A）            毫升

  裂解液（Reagent B）            毫升

  反应液（Reagent C）            毫升

  饱和液（Reagent D）            毫升

  阴性液（Reagent E）            毫升

产品说明书               1份

保存方式

保存  清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；  反应液（Reagent C）避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离

微型台式离心机：用于样品制备

黑色96孔板：用于样品荧光测定的容器

荧光酶标仪：用于样品荧光分析

实验步骤

一、 样品准备

1． 准备好25cm²细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1 X 10⁶细胞）

2． 小心加入xx  清理液（Reagent A），覆盖生长表面

3． 小心抽去清理液

4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）

5． 加入xx  清理液（Reagent A），混匀细胞

6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g

8． 小心抽去上清液

9． 加入xx  裂解液（Reagent B），充分混匀

10． 转移到预冷的1.5毫升离心管

11． 强力涡旋震荡15秒

12． 置于冰槽里孵育30分钟

13． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

14． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管

15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用   Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）

16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备

1． 准备好待测样品，例如细胞裂解悬液等，置于冰槽里备用

2． 设定好荧光酶标仪（25℃）：激发波长345nm，散发波长510nm

三、荧光测定

1． 准备1个黑色96孔板，标记为：样品孔、空白对照孔、最大对照空

2． 移取100微升（20微克蛋白）样品到样品孔里

3． 移取xx  饱和液（Reagent D）到最大对照空里

4． 移取xx  阴性液（Reagent E）到空白对照空

5． 分别加入xx  反应液（Reagent C）到所有孔里

6． 轻轻摇动黑色96孔板，混匀

7． 室温下（25℃），孵育30分钟，避免光照

8． 即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU） 

9． 计算样品钾离子浓度（注意：不要遗忘乘上稀释倍数）

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 孵育反应完成后即刻进行荧光测定

4． 用户可以选择激发波长340至380nm，散发波长450至550nm的任一波长进行检测

5． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

6． 样品浓度可以按照细胞数或蛋白量定义

7． 本公司提供系列钾生化检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感