信息摘要：

在进行薄层色谱TLC实验时，操作紫外线灯时要佩戴好紫外线防护面罩，因为你TLC试验用的都是双波长紫外线灯，短波对皮肤很眼睛伤害特大，长波对眼睛伤害很大，不做防护脸部皮肤会起泡和红肿，眼睛会造成玻璃体混浊，视力下降。

在进行薄层色谱TLC实验时，操作紫外线灯时要佩戴好LUV-40紫外线防护面罩，因为你TLC试验用的都是双波长紫外线灯，短波对皮肤很眼睛伤害特大，长波对眼睛伤害很大，不做防护脸部皮肤会起泡和红肿，眼睛会造成玻璃体混浊，视力下降。

先将LEAC-280L紫外线灯电源插上，选择打开需要照射的波长开关，把跑胶板放在紫外线灯下面照射即可。如果有LCM-26紫外线观察箱，在紫外线观察箱里面观察效果会更好。

薄层色谱（TLC）实验步骤：

1、切割薄板。通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。）

2、选取合适的溶剂体系?；衔镌诒“迳弦贫嗬氲亩嗌偃【鲇谒∪〉娜芗敛煌Ｔ谖焱楹图和榈确羌匀芗林?，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。相反，极性溶剂通?；峤羌缘幕衔锿频饺芗恋那岸味曰衔锿评牖?。一个好的溶剂体系应该使混合物中的化合物都离开基线，但并不使化合物都到达溶剂前端，Rf值好在0.15~0.85之间。虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性列于如下：

强极性溶剂：

甲醇〉乙醇〉异丙醇

中等极性溶剂：

乙腈〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙MI〉甲苯

非极性溶剂：

环己烷，石油醚，己烷，戊烷

常用混合溶剂：

乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30%。但有时较难在旋转蒸发仪上除去溶剂。

乙MI/戊烷体系：浓度为0~40%的比较常用。在旋转蒸发器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷：对强极性化合物5~30%比较合适。

二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，当其他混合溶剂失败时可以考虑使用。

3、将1~2mL选定的溶剂体系倒入展开池中，在展开池中放置一大块滤纸。

4、将化合物在标记过的基线处进行点样。我们用的毛细管是买来的，此外，毛细管也可从加热过的Pasteur吸管上拔下。在跟踪反应进行时，一定要点上起始反应物、反应混合物以及两者的混合物。

5、展开：让溶剂向上展开约90%的薄板长度。

6、从展开池中取出薄板并且马上用铅笔标注出溶剂到达的前沿位置。根据这个计算Rf的数值。

7、让薄板上的溶剂挥发掉。

8、用非破坏性技术观察薄板。好的非破坏性方法就是用紫外灯进行观察。将薄板放在紫外灯下，用铅笔标出有紫外活性的点。尽管在5.301中不用这种方法，但我们将采用另一常用的无损方法——用碘染色法。

9、用破坏性方式观测薄板。当化合物没有紫外活性的时候，只能采用这种方法。在各种TLC显色剂的调配方法中，提供了很多非常有用的染色剂。使用染色剂时，将干燥的薄板用镊子夹起并放入染色剂中，确保从基线到溶剂前沿都被浸没。用纸巾擦干薄板的背面。将薄板放在加热板上观察斑点的变化。在斑点变得可见而且背景颜色未能遮盖住斑点之前，将薄板从加热板上取下。

10、根据初始薄层色谱结果修改溶剂体系的选择。如果想让Rf变得更大一些，可使溶剂体系极性更强些；如果想让Rf变小，就应该使溶剂体系的极性减小些。如果在薄板上点样变成了条纹状而不是一个圆圈状，那么你的样品浓度可能太高了。稀释样品后再进行一次薄板层析，如果还是不能奏效，就应该考虑换一种溶剂体系。

11、做好TLC标记，计算每个斑点的Rf值，并且在笔记本中画出图样。