酪氨酸激酶JAK2蛋白对于造血细胞的JAK / STAT细胞因子信号传导至关重要。

体细胞 JAK2 V617F 突变在骨髓增殖性肿瘤 （MPN） 中很常见，其中静脉和动脉血栓形成是导致死亡的主要原因。

然而，JAK2 在止血中的作用尚不清楚。因此，研究人员在维西蒂血液研究所研究了该蛋白在JAK2敲除小鼠血小板止血中的作用。

研究概述

该研究使用了血小板和巨核细胞（MKs）中缺乏JAK2的小鼠。研究人员收集了动物的血液和组织，以分析全血细胞计数，血涂片，血浆血管性血友病因子（WWF）水平和股骨免疫组化。他们还确定了尾部出血时间。

血小板分析

对于血小板制备，研究人员从眶后神经丛中收集血液并将其抗凝在酸性柠檬酸葡萄糖中。他们通过离心分离血小板并将其重悬于缓冲溶液中。

他们使用这些样品来分析血小板表面糖蛋白，血小板蛋白和血小板聚集。

离体灌注测定

先，研究人员预先涂覆了Cellix的微通道。Vena8 荧光+ 生物芯片含1型胶原蛋白。在洗涤和阻断后，研究人员使用Cellix的VenaFlux平台通过胶原蛋白包被的生物芯片灌注从小鼠收集的血液。研究人员分析了JAK2Plt-/-在全血中在动脉剪切速率（1500 s -1）下粘附1型胶原蛋白并形成血栓的能力，见图3 A-B。

图 3.来自法莱特等人。减少动脉剪切速率下JAK2Plt-/-血小板的血栓形成。将来自Jak2Plt1 / 1和Jak2Plt2 / 2小鼠的PPACK抗凝全血标记并以1500 s21的动脉剪切速率在1型胶原固定表面上灌注。（一）代表3分钟的静止图像。条形表示 100 mm. （B） 3 分钟时的荧光强度。结果代表SD±平均值，并使用未配对的学生t检验进行比较（每组n = 3;P=.0317）。

结果

减少动脉剪切速率下JAK2敲除血小板的血栓形成

• 3分钟后，JAK2Plt-/-血小板的平均荧光强度为3.25%±2.69%，对照组为12.38±4.07%。

• 血小板表现出相似的停留时间。

• 血栓形成，而不是初的血小板粘附，在JAK2Plt-/-小鼠中受损。

本研究中的其他实验

氯化铁诱导的血栓形成

研究人员将连接到血管周围流量计的微血管流量探头定位到小鼠的颈动脉中以监测血流。然后，他们使用10%氯化铁（FeCl3）诱导血管损伤。之后，他们记录了血流量和次闭塞的时间。

激光诱导血栓形成

该实验涉及使用激光诱导血管损伤。一台高速相机捕获了荧光图像，科学家们用它来分析数据。血小板和纤维蛋白积聚和/或外渗证实损伤持续存在。

这些实验的主要发现：

• 敲除小鼠发生严重的血小板增多症并增加未成熟的血小板分数。血小板糖蛋白表达、纤维蛋白原和VWF均正常。

• 缺乏JAK2蛋白的小鼠表现出严重的脾肿大和异常造血。

• JAK2Plt-/-小鼠表现出严重的出血素质，中位出血时间为8.20分钟，而对照组为2.29分钟。

• JAK2Plt-/-小鼠在长达30分钟内未能在FeCl3-诱导的损伤后表现出闭塞。在激光诱导损伤后观察到类似的结果。

• 缺乏JAK2的小鼠表现出有缺陷的血栓形成。

• JAK2Plt-/-血小板在不同激动剂的刺激下显示扩散，聚集和信号传导受损。

结论

这些结果表明，JAK2缺失会损害小鼠的血小板活化和止血功能。

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