非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）说明书 

【产品名称】 通用名称：非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 

英文名称：API 20 NE 

【包装规格】 25 测试/盒 

【预期用途】 该产品用于非苛养、非肠道革兰阴性杆菌的鉴定。 该产品用于鉴定非苛养、非肠道革兰阴性杆菌（如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属、弧菌属 和气单胞菌属等）的标准鉴定系统，包括 8 个常规试验、12 个同化试验和 1 个数据库。 

【检验原理】 API 20 NE 试剂条由装有脱水底物的 20 个微型管构成。常规试验接种重溶培养基的盐水细菌悬液。在 培养过程中，代谢产生颜色变化，此变化可为自发或通过加入试剂显示。同化试验接种培养基，如果它 们能够使用相应的底物，则细菌生长。依照读数表读取反应，通过参考分析曲线指标或使用鉴别软件得到鉴 别。

【主要组成成分】 试剂盒组成(25 种实验) - 25 个 API 20 NE 试剂条 - 25 个孵育盒 - 25 安瓿 API AUX 培养基 - 25 张结果单 试剂条成分 在本说明书的判读表中，给出了 API 20 NE 试剂条的组成。

需要但没有提供的试剂和材料 试剂 - API NaCl 0.85 %培养基, 2 mL (Ref. 20 070) - 试剂 JAMES (Ref. 70 542) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)  Zn (Ref. 70 380) - 氧化酶 (Ref. 55 635*) * 参照品未在某些国家出售：采用同等试剂。 IVD非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07615K - zh –2009/11 2 - 矿物油 (Ref. 70 100) 材料 - 移液管或 PSIpetter - 安瓿保护器 - 安瓿架 - 一般微生物实验室设备 

【储存条件及有效期】 2~8℃储存，有效期为 12 个月。

生产日期：详见外包盒标签。

有效期至：详见外包盒标签。 

【适用仪器】 - 麦氏标准比浊管 (Ref. 70 900) No. 0.5 - API 20 NE 分析鉴定系统 (Ref.20 090) 或 apiweb™鉴定软件 (Ref.40 011) (咨询生物梅里埃) 

【样本要求】 API 20 NE 不直接用于临床或其他标本。 按照标准微生物学技术，必须首先在适合的培养基（如胰蛋白酶解酪蛋白）上分离要鉴定的微生物。 

【检验方法】 氧化酶试验 必须按照生产商的使用说明，进行氧化酶试验。应当在结果单上记录结果，因为它是最后图谱的一个有 机部分（第 21 个鉴定试验）。

菌落 API 20 NE 只应用于不属于肠杆菌科的非苛养革兰阴性杆菌。 注 1：有些非肠道的革兰阴性杆菌亦为氧化酶阴性（嗜麦芽黄单胞菌、不动杆菌…）。这些微生物也可以 用 API 20 NE 鉴定，但必须根据其它细菌学或临床标准加以选择。 注 2：对营养要求多或需要适当处理注意事项的苛养微生物（如布鲁氏菌和弗朗西丝氏菌），未包含在 API  20 NE 的数据库内。必须采用其他方法排除或证实它们的存在。

试条的准备 准备一个培养盒、盘和盖子，向盘的底部倒入约 5mL 蒸馏水或去离子水【或任何不含添加剂或可能释放 气体（如氯气、二氧化碳等）的化学物的水】，创造一种湿气。在盘的边缘部分记录标本编号。（不要在盖上 记录编号，因为在操作期间它可能错位。）从各个包装中取出试剂条。将试剂条放入培养盒中。

接种物的准备 

? 按照本产品说明书“警告和注意事项”段落所示，打开一安瓿 API NaCI 0.85 %培养基（2 mL），或使 用含 2 mL 不含添加剂的 0.85 %生理盐溶液。

? 使用吸管或滴管，通过抽吸或通过连续接触，从琼脂糖培养基上挑取 1 - 4 个形态相同的克隆。建议 使用早期培养物（18 - 24 小时）。

? 配制混悬液至浊度等于 0.5 McFarland。此混悬液在配制后必须立即使用。 注：调整接种物密度至 0.5 McFarland 非常重要；否则 API 20 NE 试剂条试验可能不能正确发挥功能。 特别是，较弱的接种物可能导致假阴性结果。在操作试剂条的过程中，不要接触反应杯，接种后不要将试剂 条长时间暴露空气。 

试条的接种非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07615K - zh –2009/11 3

? 用同一根吸管将盐水混悬液加到试验管（不是反应杯），接种试验 NO3到 PNPG。将试剂条稍前倾，将吸 管或滴管的顶部靠在杯的侧面，以避免管的底部形成气泡。 

? 按照“警告和注意事项”中所示，打开 1 个 API AUX 培养基安瓿，向安瓿加入约 200 ? L 剩余的盐混悬液。 用吸管混匀，避免形成气泡。

? 用混悬液注满由 GLU 至 PAC 试验管和杯。当心液面必是平的或稍凸，不能呈凹或新月形。杯子装得不 满或过满可能给出不正确的结果。

? 向 3 个下划线试验（GLU、ADH 和 URE）的杯子加矿物油，直至形成凸出的新月形。

? 盖上培养盒，在 29°C ± 2°C 培养 24 小时（± 2 小时）。 【阳性判断值】 对于不同生化反应预期结果的范围，查阅本说明书末尾的鉴别表。 【检验结果的解释】 读取试剂条

? 孵育期后，通过参阅判读表，判读试剂条。 

? 在结果单上记录所有自发反应（GLU、ADH、URE、ESC、 GEL 和 PNPG）。

? 为?；ね从γ馐芸掌ド⒌奈廴?，应当进行两个试验 NO3 和 TRP 的判读。要做这一点，在 NO3 和 TRP 试验判读期间，用培养盒盖子遮盖同化反应。 

? NO3试验： - 各加一滴 NIT1 和 NIT2 试剂至 NO3杯。 - 5 分钟后，红色表示阳性反应，记录在报告单上。 - 由于氮气的产生（表现为存在小气泡）有可能引起阴性反应：加 2~3 mg Zn 试剂到 NO3杯中。 - 5 分钟后，保持无色的杯子表明阳性反应，记录在报告单上。如果杯子变为粉红色，反应为阴性，因为管 中存在硝酸盐，被锌还原为亚硝酸盐。 用于细菌鉴定的反应是硝酸盐还原。当上述二个反应（产生 NO2或 N2）中的任何一个为阳性时，硝酸盐 还原反应为阳性。 但是，N2的产生则可单独用作补充试验（参阅分析图谱索引）。 

? 检测： 加 1 滴 JAMES 试剂。立即发生反应：全杯出现粉红色表明阳性结果，记录在结果单上。

? 同化试验：观察细菌生长。不透明杯子表明阳性反应。 偶尔，1 个杯子显示为弱生长。在这种情况，通过与试剂条上的其他试验强度比较，结果应当记录为 或 ±。 

注意: 一旦进行了上述判读，如“解释”段落中所示，鉴定是可能的。在下列情况，必须重新孵育： - 无区别 - 无法接受或可疑的图谱； - 如果对获得的图谱标注了以下备注： 在 48 小时孵育前鉴定是无效的 使用习惯或滴管，通过抽吸吸走 NIT 1、NIT 2 和 JAMES 试剂，立即用矿物油掩蔽试验 NO3和 TRP，以便形 成凸的新月形。在 29°C ± 2°C 重新孵育 24 小时，除了只应在 24 小时判读的前 3 个试验（NO3、TRP 和 GLU）， 其余试验再读一次结果。 

说明： 采用数字谱获得鉴定。

? 测定使用率： 在结果表上，将结果分成 3 组，每组标记为编号 1、2 或 4。在每组内加阳性反应相应的数字，得到一个 7 位数；氧化酶反应构成第 21 个反应，如果为阳性则数值为 4。 

? 鉴定：非苛养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法） 版本号 07615K - zh –2009/11 4 这采用数据库（V7.0）进行 * 棒状杆菌鉴定用编码册 - 查找图谱中的数字谱。 * 采用 apiweb™鉴定软件 - 通过键盘手动输入 7 位数的数字谱。