各種動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

規(guī)格：200 mL/kit 

保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫

避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后，保存于室溫。

試劑盒組成：  試劑A 200mL 試劑C 100mL 細(xì)胞洗滌液 200mL 紅細(xì)胞裂解液 100mL

操作步驟：  1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時(shí)，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊 加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀 釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過(guò)離心管的三分之 二，否則會(huì)影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方， 注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液， 然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢?形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離 心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象。） 2. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積 越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，的分離條件需摸 索，離心轉(zhuǎn)速不超過(guò)1200g）。 3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì) 胞為單個(gè)核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層，如圖所示（個(gè) 體差異或者是分離條件不同，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。 4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性 粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌 細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞 裂解液）。 5. 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。 6. 重復(fù)步驟6 7. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。

注意事項(xiàng)：  A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免 微生物污染。。 B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是 分離示意圖 血漿層 單個(gè)核細(xì)胞層 試劑 C 試劑 A 紅細(xì)胞層 中性粒細(xì)胞層 溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。 C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以?xún)?nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。 D. 血液樣本不需稀釋?zhuān)苯舆M(jìn)行分離即可。 E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集， 大大降低細(xì)胞得率及純度。 F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。 G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸 索的分離條件。 H. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免微生 物污染。 I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應(yīng)提 供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱(chēng)。