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色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效。
死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置（进样口）到检测位置（检测器流通池）这一段的体积（PS:除去色谱柱中填料体积），一旦色谱柱连接，这段体积是不变的（死的）。
死体积狭义上指的是色谱柱中未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置（进样口）到检测位置（检测器流通池）这一段的体积（PS:除去色谱柱中填料体积），一旦色谱柱连接，这段体积是不变的（死的）。
对于HPLC来说，该如何计算死体积呢。
死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液（方法中会有规定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液，也有直接用100％色谱纯甲醇进样的情形）时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t0），这就是t0的实测结果。
然后通过计算得到系统死体积:死体积（V0) = 死时间t0×流动相的流速F。
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