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许多有机化合物在紫外区具有特征的吸收光谱，因此可用紫外分光光度计对有机物质进行定性鉴定，结构分析及定量测定。紫外分光光度法定量测定的依据是比耳定律。首先确定化合物的紫外吸收光谱，确定大吸收波长。在选定的波长下，作出化合物溶液的工作曲线，根据在相同条件下测得待测液的吸光度值来确定待测液中化合物的含量。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此每种物质就有其*的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外分光光度光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
紫外分光光度计的主要校正内容介绍：
1.吸光度校正
校正吸光度常用一很纯物质一定浓度的溶液为标准，且此溶液的吸光度系数经不同实验室核对，为了使标准液吸光度不受测定波长的微移动而有改变，常选择具有较平滑吸收高峰的物质，同时要求溶液稳定，且在相当的波长范围内吸收度的改变符合Lambert-Beer定律，常用硫酸铜、硫酸铵钴和硝酸钠或钾的溶液。铬酸钾溶液是常用的标准溶液，此溶液在紫外区和可见区均适用。
2.波长或波数校正
可用具有窄吸收带的溶液，滤光片或蒸气来校正所需要的光波范围。如果要求很高的精密度时，可用放电灯泡发射的射线来校正。有的光谱仪其上已装有一个为校正用的灯。苯的蒸气对校正一定范围的波长亦很有用，可用一小滴苯放于1cm厚的吸收杯中，测其吸收波长，在远紫外区可用氧气的吸收带进行校正。用各种稀土金属的滤光片，可以很快地校正波长，但准确度不如上述方法高。常用含有钬和钕、镨离子的滤光片。
3.杂散光校正
小量的杂散光往往会引起较大的测量误差，它的校正可用一个能*吸收某一波长单色光，且在其他波长吸收很弱的溶液。从这个溶液所表现的透光情况可推测杂散光的近似值。由杂散光带来的伪吸收带，亦可用Lambert-Beer定律来检查，但用此定律检查伪吸收带误差较大。由切断范围之外所表现的透射比可得出近似的杂散光百分数。若所含杂散光大于0.1%，应设法减低，或对测得的吸收光度进行校正。由杂散光引起的误差与杂散辐射成正比，因此校正值很容易从化合物的近于正确的曲线计算而得。此外还可用一个适当的滤光片，该滤光片在测定波长范围内*透光，但吸收此范围外的光波，由此来消除杂散光。
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