番红-固绿染色（软骨）在涉及关节软骨及软骨下骨的形态学研究中，常需要联合使用多种染料以显示其组织学结构。其中，起源于上世纪60年代的番红O-固绿染色因可以直观反映关节软骨、软骨下骨和骨组织的结构而备受青睐。

软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。

番红-固绿染色步骤：
（1）骨组织固定、脱钙，制成石蜡切片；

（2）切片常规脱蜡至水；

（3）入新鲜配制的Weigert染液染色；

（4）流水冲洗；

（5）酸性乙醇分化液分化；

（6）蒸馏水洗；

（7）在固绿染色液内浸染；

（8）蒸馏水洗；

（9）入番红O染液内浸染；

（10）蒸馏水洗；

（11）用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，再用蒸馏水洗；

（12）分别用95%乙醇，无水乙醇脱水；

（13）二甲苯透明，中性树脂封固；

（14）镜检。

染色结果：软骨基质深红色，软骨细胞核蓝色，细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色。