前言：
碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類殺吸蟲藥，可以抑制蟲體線粒體的磷酸化過程，從而阻止蟲體內(nèi)三磷酸腺甙（ATP）的合成，導(dǎo)致蟲體能量代謝的活力迅速減弱而死亡，隨著國(guó)內(nèi)驅(qū)蟲藥的廣泛應(yīng)用和研究，發(fā)現(xiàn)碘醚柳胺有明顯胚胎毒性，食用含有碘醚柳胺的動(dòng)物性食品會(huì)影響身體健康。
本文參照《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見稿）》，利用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）凈化樣液，再通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種對(duì)牛奶中碘醚柳胺殘留量進(jìn)行分析的方法。
關(guān)鍵詞：
牛奶，碘醚柳胺，固相萃取
1 實(shí)驗(yàn)過程
1.1儀器與試劑
MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置，貨號(hào)：PZ0008，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；
E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；
4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；
EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；
冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠 ；
甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；
乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；
甲酸、氨水、三乙胺等化學(xué)品均為分析純或以上規(guī)格，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
1.2 工作液配制
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100mg/瓶，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)品適量（相當(dāng)于有效成分約10mg），精密稱取，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液。
碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液：碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液。
依次移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，得到濃度依次為0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。
1.3 實(shí)驗(yàn)部分
1.3.1 樣品制備
取牛奶試樣2g，置于50 mL聚丙烯離心管中，加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液超聲提取10 min，8000 r/min離心5 min，收集上清液至另一50 mL離心管中，向殘?jiān)屑?/span>入8.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，用乙腈定容至20 mL，混勻，待凈化。
1.3.2 固相萃取凈化
EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）用5mL乙腈進(jìn)行活化，取1.3.1待凈化液5.0 mL上樣，上樣結(jié)束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱，收集洗脫液，使用E.T.氮吹濃縮儀在45℃下氮?dú)鉂饪s至近干，加2.0 mL甲醇渦旋混勻，過微孔濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。
1.3.3 LC-MS/MS儀器條件
色譜柱：Kinetex Luna PFP（2.6μm，3*100mm）
檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；
流動(dòng)相：A:0.1%氨水水溶液 B: 甲醇
流速：0.3mL/min
進(jìn)樣量：5μL
表1流動(dòng)相梯度洗脫表
時(shí)間/min | 流動(dòng)相A/% | 流動(dòng)相B/% |
0 | 70 | 30 |
5 | 0 | 100 |
8 | 0 | 100 |
8.1 | 70 | 30 |
10 | 70 | 30 |
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1 標(biāo)液色譜圖
圖2 碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)曲線
3 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)使用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）對(duì)牛奶中碘醚柳胺進(jìn)行凈化，通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，該方法的加標(biāo)回收率范圍89.6%~95.3%，RSD為2.3%，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。也說明EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）能很好的完成方法中的凈化工作，結(jié)果穩(wěn)定、可靠。
參考文獻(xiàn)
[1] 《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見稿）》
表 2 加標(biāo)回收率
加標(biāo)濃度μg/kg | 回收率（%） | 平均值 | RSD | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | % | % | |
20 | 91.6 | 91.0 | 89.9 | 89.6 | 90.6 | 95.3 | 91.3 | 2.3 |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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