| 供货周期 |
一个月 |
应用领域 |
化工,生物产业,制药/生物制药 |
人可溶性转铁蛋白受体1试剂盒，借双抗夹心 ELISA 法，检测人血清等样本中 sTfR1。操作涵盖样本准备等多步，各环节有要点，助力精准测定 。
人可溶性转铁蛋白受体1试剂盒介绍
人可溶性转铁蛋白受体1试剂盒在科研与临床检测中扮演着重要角色，主要用于精准测定人血清、血浆、细胞培养上清及其他相关生物体液中可溶性转铁蛋白受体 1（sTfR1）的含量。对 sTfR1 的检测，有助于深入了解人体铁代谢状态，在缺铁性贫血等疾病的诊断与病情评估方面意义重大。
一、检测原理
该试剂盒多采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）原理。在试剂盒的酶标板孔内，提前包被好针对人 sTfR1 的特异性捕获抗体。检测时，将标准品与待测样本依次加入酶标板孔。样本中的 sTfR1 会迅速与包被在孔壁上的捕获抗体特异性结合。温育一段时间，确保结合反应充分后，通过洗涤操作去除未结合的杂质。随后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，其能与已结合在捕获抗体上的 sTfR1 再次特异性结合，从而形成 “捕获抗体 - sTfR1 - 酶标检测抗体" 的稳定免疫复合物。再次洗涤，清除未参与反应的多余酶标检测抗体。紧接着，向各孔中添加底物 TMB。在 HRP 的催化作用下，原本无色的 TMB 底物发生化学反应，逐步转变为蓝色产物。反应持续一段时间后，加入终止液，使反应迅速停止，此时溶液颜色由蓝色转变为黄色。溶液颜色的深浅与样本中 sTfR1 的含量呈正相关，借助酶标仪在 450nm 波长下测量各孔溶液的吸光度（OD 值），依据标准品的 OD 值绘制出标准曲线，即可精准推算出待测样本中 sTfR1 的浓度 。
二、操作步骤
样本准备：血清样本采集后，需在 1000×g 的条件下离心 10 分钟，小心分离出血清；血浆样本同样按此离心条件处理；细胞上清液则需以 1000×g 离心 10 分钟，去除其中的颗粒和聚合物。若样本不立即使用，应分成小份，在 - 70℃环境下保存，防止反复冻融，使用前需在室温下充分解冻并确保均匀 。
试剂准备：从冰箱取出试剂盒后，需将所有试剂在室温下平衡至稳定状态，并充分混匀 。同时，依据实验所需检测的样本数量，确定酶标板的使用条数，标准品孔和空白孔建议设置复孔，以提高检测准确性 。
加样：在酶标板上精确设置标准品孔、空白孔与待测样本孔。向标准品孔中加入 50μL 已稀释好的不同浓度标准品；待测样本孔加入 50μL 处理好的样本；空白孔则不加任何试剂 。加样完成后，立即向各孔中加入 50μL 生wu素标记的抗体，随后盖上膜板，轻轻振荡使其充分混匀，在 37℃环境下温育 45 分钟 。
温育与洗涤：温育结束后，甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒后甩去洗涤液，并用吸水纸拍干，此洗涤操作需重复 4 次。若使用洗板机，洗涤次数应增加一次 。
后续反应与检测：每孔加入 100μL 亲和链酶素 - HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30 分钟。再次重复上述洗涤步骤 。接着，每孔加入底物 A、B 各 50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育 5 分钟 。之后，迅速向每孔加入 50μL 终止液，加入终止液后应立即使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值 。依据标准曲线，计算出样本中 sTfR1 的浓度，若样本进行过稀释，还需乘以相应的稀释倍数得到实际浓度 。
三、注意事项
试剂盒中的所有试剂在使用前必须充分平衡至室温，避免因温度差异影响检测结果的准确性 。
样本采集、处理过程务必严格遵循规范操作，防止样本受到污染或发生溶血、脂血等情况，以免干扰检测结果 。
洗涤过程至关重要，既要确保充分去除杂质，又要避免过度洗涤导致已结合的物质脱落 。
加样操作要精准、迅速，尽量缩短各孔之间的加样时间间隔，保证实验条件的一致性 。
实验完成后，应尽快读取 OD 值，避免因时间过长导致结果出现偏差 。
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