C3c 优质试剂盒

产品货号:A701
产品名称:C3c
产品规格:250 µL
产品品牌:Quidel
参考价格(美元):249
C3c 优质试剂盒

液体类标本：
标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。
◇      血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      尿液、胸腹水、脑脊液：
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇      组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

细胞株

　　Q1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

　　要冷藏??！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。

人胃平滑肌细胞

　　Q2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺?；∫窖赴行脑谄浞裣钅恐信渲品肿傲烁吲ǘ龋?00倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-24?C保存。

　　Q3.细胞计数及存活测试
1、原理：
(1)计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。
(2)血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。
(3)存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率：活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料;因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。