乾思 生物編輯整理： 教 師：XXX 實驗類型：基礎 學　　時：8 （參考） 內　　容： 一、實驗目的： 1.以檢測IL－2為例，使學生掌握一定的細胞培養(yǎng)技術。 2.使學生掌握一定的細胞因子檢測的一些主要方法。 3.掌握免疫細胞分離的主要技術和方法。 二、實驗原理： 檢測細胞因子對于闡明機體免疫應答機制及相關疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和臨床治療都有重要意義。細胞因子的檢測主要分為免疫學、生物學和分子生物學三種檢測方法。 生物學方法檢測細胞因子活性，其原理時根據(jù)細胞因子對特定的依賴性細胞株（即靶細胞）的促增值作用，以增值細胞中的DNA合成或者酶活性作為指標，間接推算出細胞因子的生物學活性。 三、試劑與器材： 10％FCS－RPMI－1640培養(yǎng)液，刀豆蛋白A（ConA），3H－TdR，C57BL小鼠，IL－2標準品，PHA。 離心機、超凈臺、分光光度儀、細胞培養(yǎng)板等。 四、操作方法： 1.人外周血T細胞PBMC分離 2.PHA刺激產(chǎn)生IL－2 3.離心去沉淀回收上清 4.IL－2活性測定 5.CTLL－2細胞株培養(yǎng) 6.MTT摻入 7.測OD值570nm 8.結果分析 五、關鍵步驟與注意事項： 1.CTLL－2細胞存活率應大于95％。 2.因標本中含IL－4等，可影響TL－2的測定，采用抗IL－4 mAb吸附劑出去IL－4。 3.整個操作過程中應該注意無菌操作。 4.細胞培養(yǎng)時要做復孔并設陰、陽性對照。 六、思考題： 1.誘導產(chǎn)生IL－2時需要注意哪些方面？ 2.IL－4會對IL－2的測定產(chǎn)生影響，應如何消除？ 3.PHA誘導產(chǎn)生IL－2的機理是什么？

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