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馬傳染性貧血?。↖HA）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標(biāo)本中馬傳染性貧血病(IHA)。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，與樣品中傳染性貧血病(IHA)溫育后，加入生物-素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中馬傳染性貧血病(IHA)的存在與否。

試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶8樣品稀釋液6ml×1瓶

2鏈霉親和素-HRP6ml×1瓶9陰性對照0.5ml×1瓶

3酶標(biāo)包被板12孔×8條10陽性對照0.5ml×1瓶

4生物-素標(biāo)記的抗-IgG抗體6ml×1瓶11密封袋1個

5顯色劑A液6ml×1瓶12封板膜3張

6顯色劑B液6ml×1/瓶13說明書1份

7終止液6ml×1瓶

操作步驟

1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，37℃溫育45分鐘。

3.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。

5.加生物-素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物-素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.洗滌：操作同4。

7.加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

8.洗滌：操作同4。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

結(jié)果判定

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為傳染性貧血病(IHA)陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為傳染性貧血病(IHA)陽性

注意事項

1．操作嚴(yán)格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．馬傳染性貧血?。↖HA）ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。