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磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)水平。用純化的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)，和HRP標記的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)抗原，使它們競爭結合，，經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)的含量。 

試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶

8標準品S1

（960 ng/L）0.5ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶標準品S2

（480 ng/L）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條標準品S3

（240 ng/L）0.5ml×1瓶

4顯色劑A液6ml×1瓶標準品S4

（120ng/L ）0.5ml×1瓶

5顯色劑B液6ml×1瓶標準品S5

（60ng/L）0.5ml×1瓶  

6終止液6ml×1/瓶9說明書1份

7樣品稀釋液6ml×1/瓶10封板膜2張

操作步驟

1.加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

8.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．磷脂酰肌醇3,5二磷酸(PI(3,5)P2)試劑盒不同批號組分不得混用。