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产品简介：

真核生物 mRNA 5’端的帽结构为mRNA 的稳定、转运和翻译所需，但体外转录制备得到的 RNA 并没有帽结构。为了提高这些 RNA 在体外翻译、转染和微注射应用的稳定性，很有必要为其加上 Cap0 帽结构（m7GpppN 帽结构或m7G 帽结构）。虽然 Cap0 RNA 可以细胞内被有效的翻译成蛋白质，但在体内

（而不是细胞内）使用时会引起免疫反应，而 Cap1 RNA 可以逃逸免疫反应。因此很多时候需要制备 Cap1 RNA。Cap1 帽结构由 Cap0 帽结构甲基化而得。本产品是专门用于为无帽RNA 分子加上Cap1 帽结构的试剂盒。此加帽过程由RNA triphosphatase, guanylyltransferase、guanine methyltransferase、 m7GpppN 甲基化酶四个酶催化的连贯反应组成，其示意图如下：

产品特点：

1.即开即用，用户只需提供无帽 RNA 即可。

2.加帽效率高，接近 9%。

3.本试剂盒足够 40 次 20μL 体系的无帽 RNA 加 Cap0-Cap1 帽反应，每次可以处理多达 10μg 的无帽RNA。

4.本试剂盒也可以用于无帽RNA 加 Cap0，只是在设置反应时不加 RNA Cap0

甲基化酶。

5.所得 Cap1 RNA 经过纯化后可以直接用于后续实验。也可以不经过纯化用于

polyA 加尾反应。

6. RNA 加 Cap0 和 Cap1 试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成份 规格包装

RNA 加 Cap0 反应液 A 80 μL0.5mL 绿盖管

RNA 加 Cap0 反应液 B 40 μL0.5mL 黄盖管

RNA 加 Cap0 反应液 C 40 μL0.5mL 蓝盖管

RNA 加 Cap0 酶，10U/μL 40 μL0.5mL 红盖管

RNA Cap0 甲基化酶，50U/μL 40 μL0.5mL 红盖管

使用手册 1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存、有效期一年。

自备试剂

超纯水、体外转录试剂盒，RNA 纯化试剂盒

使用方法：

一、体外转录制备 RNA 模板（本试剂盒不含所需试剂）

1.用自备的体外转录剂盒制备 RNA 模板。

2.纯化 RNA 并测定其浓度。纯化的 RNA 需要溶解在 RNase-free 水中。二、加帽反应

3.在一个RNase-free 离心管中，加入10μg 的纯化的无帽RNA，补RNase-free水到 14μL。

4.65℃变性 10 分钟后，放冰上待用。变性能打开可能空间阻碍酶接触 RNA 末端的二级结构，非常重要。如果加帽效果不好，还可以提高温度到 75℃和85℃变性 10 分钟。

5.再在另外一个 RNase-free 离心管中加入下列成分：

成分加入量

RNA 加 Cap0 反应液 A2 μL

RNA 加 Cap0 反应液 B1 μL

RNA 加 Cap0 反应液 C1 μL

RNA 加 Cap0 酶，10U/μL1 μL

RNA Cap0 甲基化酶，40U/μL1 μL

6.最后将冰上放置的 14μL 无帽 RNA 加入并轻柔吹打混匀。

7.37℃保温 2 小时。

8.  得到的 Cap1 RNA 可以不经过纯化直接用于 polyA 加尾。也可以纯化后用于各种后续实验。如果在设置反应时不加 RNA Cap0 甲基化酶，则得到的RNA 是 Cap0 RNA。

选择我们的RNA 加 Cap0 和 Cap1 试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！