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产品简介：

Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，同时其蛋白回收率低，跟后续质谱分析不兼容，为此本公司在传统 Tricine-SDS-PAGE 电泳的基础所，进行了改良很升级，并推出本产品。

产品特点：

1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。

2.安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。

3.电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。

4.分辨率高，只需要两层胶（浓缩胶和分离胶）就可以达到过去三层胶的效  果（浓缩胶、隔离胶和分离胶）。

5.蛋白片段的回收率比常规 Tricine-SDS-PAGE 高。

6.纯化的蛋白可以用于后续的质谱分析。

7.本产品可配 30 块 14cm×14cm×0.75mm 的 mini 胶

8.Tricine-SDS-PAGE 电泳试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成分规格包装

丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰

胺干粉(29:1)60g250 mL 棕塑瓶

Tricine-SDS-PAGE

配胶液250 mL 本色瓶

TEMEDCAS:110-18-91.5 mL 棕色管

过硫酸铵CAS:7727-54-01 g1.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE上样缓冲液，2×1 mL1.5 mL 棕色管

Tricine-SDS-PAGE电泳液干粉约 80g250 mL 本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

常温运输和保存（上样液需要-20℃保存），保存期为一年。

自备试剂

Milli-Q 纯水或同等级别的去离子水、水饱和的异丁醇

使用方法：

以下操作以配制由4%浓缩胶和10%分离胶的体系为例子说明配制胶的流程。如果用户需要调整胶的浓度，请按比例修改。

1.  配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29：1）(丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液简称 AB 溶液，下同)：直接在装有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉双丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自备的去离子水，拧紧瓶盖后 37℃水浴，

其间颠倒摇晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（99：1），

该溶液最好 4℃避光保存，在一个月内用完。AB 溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

2.配制 3%的 APS（过硫酸铵）：按每 30mg 过硫酸铵干粉加 1 mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的 1.5 mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。此溶液必须现配现用。过硫酸铵极其容易吸潮，没用完的过  硫酸铵一定要拧紧盖子。如果吸潮，可用自备的分析纯过硫酸铵替代。

3.配制 10×Tricine-SDS-PAGE 电泳液：在烧杯中加入约 800mL 去离子水，然后加入本试剂盒提供的约 80g Tricine-SDS-PAGE 电泳液干粉， 65℃加热搅拌溶解，用去离子水定容到 1000mL。每次使用时用去离子水稀释 10 倍即得 1×Tricine-SDS-PAGE 电泳液。

4.配制 30 mL 10%分离胶（足够灌两块 0.75 mm×14 cm×14 cm 胶）。

A)标记 1 个 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（29：1）10 mL

Tricine-SDS-PAGE 配胶液16.8 mL

离子水2.7 mL

B)混匀后真空脱气 10-15 分钟。

C)灌分离胶： 在分离胶瓶中加入 450 ?L 3%的 APS 溶液和 18 ?L TEMED 溶液，轻轻旋转混匀。用吸管将分离胶溶液沿着一个隔条的边缘加到玻璃板夹层中，直到溶液的高度距离玻璃上沿还有 1 cm。

D)盖 1cm 高的自备水饱和的异丁醇或 70%乙醇使胶面跟氧气隔绝（氧气会抑制胶的凝固）。让分离胶在室温聚合 30-45 分钟。

5.配制 10 mL 4%浓缩胶（足够灌两块 0.75 mm×14 cm×14 cm 胶）。

A)在一个 50 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（29：1）1.32 mL

Tricine-SDS-PAGE 配胶液1.52 mL

离子水6.85 mL

B)混匀后真空脱气 10-15 min。

C)将 300 uL 新鲜配制的 3%的过硫酸铵溶液和 10 uL TEMED 溶液加入到溶液中，轻轻旋转混匀。用吸管将积层胶溶液缓缓地沿着一侧隔条边缘加入到玻璃平板夹层中，直到夹层中的溶液离玻璃板顶部约1cm 高为止。

D) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再补加浓缩胶溶液填满梳子间的空隙。注意避免产生气泡。让浓缩胶在室温聚合 30-45 分钟。

6.小心拔出塑料梳子，在上层和下层缓冲槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE电泳液，并用其冲洗加样孔，去除没有凝聚的丙烯酰胺溶液。注：本产品提供 10 升的电泳液干粉，将所有干粉溶解在 600-800 mL 去离子水中， 最后定容到 1000 mL 即得 10×电泳液，可以室温放置，不需要灭菌，用时再用去离子水稀释 10 倍成 1×电泳液。

7.在密封的螺盖微量离心管中，用 2×Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液按 1： 1 的比例稀释蛋白样品，于 0℃加热 10 分钟。注意：如果样品是蛋白沉淀物，则加入 100 ?L 新稀释得到的 1×Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液溶解；如果样品是蛋白稀溶液，蛋白浓度过低，可先浓缩蛋白质再溶解。与Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液混合后的样品如未经 70℃加热灭活蛋白酶，切勿放于室温。

8.上样。如果后续用考马斯亮蓝染色，对于成分复杂的蛋白质样品，上样量  最好为 20 uL（含 25-50 ?g 总蛋白质）；对于只有一种或几种蛋白质的样品，上样量最好为 1-10 ?L。如果用银染，上样量可减少 10-100 倍。

9.电泳。125-150 V 恒压电泳直到电泳指示剂到达胶板的边缘。一般需要4-5 h。注： 本产品的 Tricine-SDS-PAGE 上样液使用了考马斯亮蓝 G-250 作为指示剂，其泳动速度比最小的肽还快。

10.终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理（最好用银染染色，节约样品）。  注意：考染或银染时，基本步骤同蛋白 PAGE 胶染色，只是任何一步（尤其是固定步骤）的处理时间都不要超过 20 分钟，否则多肽非常容易扩散

出 PAGE 胶而降低检测的灵敏度

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