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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是氯仿-異戊醇（Chloroform-Isoamyl Alcohol, CI）的 24:1 的混合液，用于核酸提取時去除蛋白質(zhì)、多糖、脂類和酚類等雜質(zhì)。

再基于苯-酚的核酸純化中，苯-酚的作用是使裂解液中的蛋白質(zhì)變性，同時抑制核酸酶對核酸的降解。用苯-酚處理裂解液時，由于蛋白分子表面的很多極性基團與苯-酚相似相溶，故蛋白分子溶于酚相，而核酸溶于水相，從而將核酸和蛋白質(zhì)分開。但苯-酚和水有 10%左右的互溶，因此酚抽提后，必須用 CI 混合液處理以讓水和酚徹-底分開，徹-底去除水相中 10%左右的殘留苯-酚，否則它們會嚴重抑制后續(xù)的酶反應。CI 混合液中異戊醇的作用是降低表面張力，從而減少操作過程（常常有震蕩步驟）中氣泡的產(chǎn)生，而這些氣泡的表面張力可能會使核酸斷裂。另外，異戊醇還有助于水相和酚相分相，使離心后的上層水相（含核酸）、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩(wěn)定，便于移取上清。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

CI 混合液（24:1，核酸純化用）250 mL250 mL 棕玻瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存，有效期為 12 個月。

自備試劑

無

使用方法：

如果用于沉淀法回收核酸，則需要無水乙醇或異丙醇、3 M 乙酸鈉溶液 pH 5.2、75%乙醇和超純水。如果用于過柱法回收核酸，則需要硅膠模離心吸附柱，上柱 液，洗柱液和超純水。

該試劑為基于苯-酚的核酸提取過程中的必須試劑，使用方法參考分子克隆手冊等參考書， 或?qū)嶒炇?SOP。下列操作僅以 0.5 mL 樣本供參考。

一、沉淀法：

1.將 0.5 mL 含核酸的細胞裂解液，或含有核酸、DNA、蛋白質(zhì)、脂類的混合液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。

2.加入 0.5 mL 的自備 Tris-飽和酚（對 DNA 純化）或酸酚（對 RNA 純化）和 0.2 mL 的本產(chǎn)品。

3.渦旋震蕩 2 分鐘。

4.常溫 13000×g 離心 5 分鐘，溶液將呈兩層相。將含有核酸的水相轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。兩相的相對位置跟樣本比重有關，并不是任何時候無色水相都在上層。如果樣本含鹽濃度高，比重大，水相也可能在下層。

5.在上清中加入 0.1 倍體積的 3 M 乙酸鈉溶液，pH 5.2 和兩倍體積的自備無水乙醇（兩倍體積的乙醇可以用一倍體積的異丙醇替代），顛倒 10 次充分混勻。

6.常溫 13000×g 離心 15 分鐘。

7.小心棄上清，不要觸及管底離心面的沉淀。

8.加入 1 mL 75%乙醇，顛倒 10 次。

9.常溫 13000×g 離心 3 分鐘。

10.小心棄上清后短暫離心 30 秒，去掉殘留的液體（約 50uL）。

11.室溫敞開蓋子兩分鐘。

12.加入超純水溶解核酸，然后進行濃度測定、電泳，PCR 等后續(xù)檢測。

二、過柱法：

13.將 0.5 mL 含核酸的細胞裂解液，或含有核酸、DNA、蛋白質(zhì)、脂類的混合液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。

14.加入 0.5 mL 的自備 Tris-飽和酚（對 DNA 純化）或酸酚（對 RNA 純化）和 0.2 mL 的本產(chǎn)品。

15.渦旋震蕩 2 分鐘。

16.常溫 13000×g 離心 5 分鐘，溶液將呈兩層相。將含有核酸的無色水相轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。兩相的相對位置跟樣本比重有關，并不是任何時候無色水相都在上層。如果樣本含鹽濃度高，比重大，也可能在下層。

17.在上清中加入 2 倍體積的自備上柱液，所用體積跟所用上柱液的配方相關。

18.顛倒混勻，取 0.7 mL 樣本和上柱液的混合液上柱。

19.常溫 13000×g 離心半分鐘，棄穿透液。

20.再取 0.7 mL 樣本和上柱液的混合液上同一個柱子。

21.常溫 13000×g 離心半分鐘，棄穿透液。

22.重復第 20-第 21 步，直到混合液全部上柱。

23.加入 0.7 mL 洗柱液。

24.常溫 13000×g 離心半分鐘，棄穿透液。

25.重復第 23 和第 24 步一次。

26.不加任何溶液，將吸附柱離心半分鐘。

27.在吸附柱中加入 30-50 μL 的超純水，室溫放置 2 分鐘后，將吸附柱放入一個新的 1.5 mL 離心管中，13000×g 離心半分鐘，收集的穿透液就是純化的核酸溶液。

28. 對所得的核酸溶液進行濃度測定、電泳，PCR 等后續(xù)檢測。

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