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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

RT-LAMP MasterMix 含有 RT-LAMP 擴(kuò)增所需的所有成分， 可以用于RT-LAMP 等溫?cái)U(kuò)增。RT-LAMP 即 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增），它利用 4 條模板專一的特異引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄和 LAMP 擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測(cè)范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于定性 RT-PCR 技術(shù)，同時(shí)還不需要昂貴的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測(cè)，廣泛用于各個(gè)領(lǐng)域。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有紅色電泳示蹤劑，擴(kuò)增后可以直接上樣，不需要上樣液。

2.高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴(kuò)增比自配的試劑更低。

3.高擴(kuò)增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)。

4.65℃左右逆轉(zhuǎn)錄和等溫?cái)U(kuò)增，不需要貴重儀器。

5.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的 RT-LAMP 擴(kuò)增。

6.提供擴(kuò)增對(duì)照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

7.20 ?L 體系可以加 10 ?L 的模板。

8.RT-LAMP MasterMix（電泳法）只能用于科研，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

RT-LAMP MasterMix

（含電泳示蹤劑，待加酶）200 ?L0.5 mL 白蓋管

逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

陽(yáng)性對(duì)照模板-引物混合物50 ?L0.5 mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)樣品制備，多出的兩個(gè)一個(gè)是樣品制備陽(yáng)性對(duì)照，一個(gè)是樣品制備陰性對(duì)照。

2.配制5×RT-LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級(jí)別的下列引物干粉稀釋到標(biāo)準(zhǔn)所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，最后

得到1 mL的5×RT-LAMP 引物混合液，此混合液足夠250次20 ?L體系的LAMP擴(kuò)增。如果需要配制的5×RT-LAMP引物混合液體積異于1 mL，則各成分的用量請(qǐng)按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

注：如果沒(méi)有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時(shí)， 請(qǐng)將100uL 逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔混勻，然后再使用。如果有N個(gè)樣品，則在N+2個(gè)反應(yīng)管中加入以下組份，  多出的一管是RT-LAMP擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照（PC），一管是RT-LAMP擴(kuò)增陰性對(duì)照

（NC）：

成份N+2 個(gè)樣品管RT-LAMP

擴(kuò)增PCRT-LAMP

擴(kuò)增 NC

RT-LAMP MasterMix

（加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 5×RT-LAMP 引物

混合液4 ?L不加4 ?L

陽(yáng)性對(duì)照模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備模板 RNA1-6 ?L不加不加

補(bǔ)自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

注意：由于本產(chǎn)品含有電泳示蹤劑，不宜加入可視化染料，否則會(huì)產(chǎn)生顏色干擾?？杉尤肽承晒馊玖?，具體可以加入哪些，需要預(yù)先測(cè)試電泳示蹤劑對(duì)熒光染料的影響。如果加入了熒光染料，則需要在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)和實(shí)時(shí)檢測(cè)。

4.混勻，置于65℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金 屬浴或水浴保溫，沒(méi)有熱蓋，必須覆蓋50uL的石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，嚴(yán)重影響反應(yīng)效率。

5.擴(kuò)增結(jié)束后取5-10 ?L擴(kuò)增產(chǎn)物直接上樣（本產(chǎn)品含有紅色電泳示蹤劑，不需要再加上樣液，紅色示蹤劑的泳動(dòng)速度相當(dāng)于50 bp的DNA）進(jìn)行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有RT-LAMP擴(kuò)增的樣品將可見LAMP特征性DNA梯度電泳圖譜

6.結(jié)果分析：如果本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物能夠擴(kuò)增而陰性對(duì)照不能擴(kuò)出，則實(shí)驗(yàn)有效。如果陽(yáng)性對(duì)照-引物混合物沒(méi)有擴(kuò)增出條帶，則試劑盒的問(wèn)題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。如果陰性對(duì)照（水作為模板）有擴(kuò)增出條帶，則說(shuō)明RT-LAMP 樣品或試劑有過(guò)去的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，如果不能解決，

可以重新設(shè)計(jì)RT-LAMP引物擴(kuò)增新的靶片段。

選擇我們的RT-LAMP MasterMix（電泳法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！