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产品简介：

碱变性法是最常见的质粒 DNA 提取方法，其过程是首先菌体经离心悬浮后，细胞被 SDS 和碱裂解，并且碱使基因组 DNA 和质粒DNA 变性，随后用酸中和，质粒DNA 可以快速复性，而基因组 DNA 不能快速复性，故可以通过离心去除。如果用柱式法，则含质粒 DNA 的上清用离心吸附柱吸附质粒DNA，洗去杂质，得到纯化的质粒 DNA。但此方法不适合特别大的质粒。因此本公司推出沉淀法，用于纯化柱式法不能回收的质粒 DNA。

产品特点：

1.快速、步骤少，整个操作在 40 分钟左右完成。

2.质粒 DNA 纯化溶液 B 中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。

3.产量高，一次可以处理 1-5 mL 过夜培养的菌液，每毫升过夜培养的菌液可以提取到 2-5 ?g/mL（取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝）。

4.本产品足够 50 次微量提取。

5.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒 OD 比值在 1.8-2.0 之间，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR 等。

6.质粒 DNA 纯化试剂盒（沉淀法）只能用于科研。

产品参数：

产品规格

成分规格包装

质粒 DNA 纯化溶液A13 mL15 mL 本色瓶

质粒 DNA 纯化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

质粒 DNA 纯化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

RNase A 溶液，10 mg/mL0.6 mL1.5 mL 本色管

去蛋白溶液30 mL30 mL 棕玻瓶

质粒沉淀液30 mL30 mL 本色瓶

DNA 洗脱液（基因组纯化专用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份无

保存和运输

常温运输和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存低温运输，有效期一年。

自备试剂

75%乙醇。

使用方法：

从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养 12-16 小时（摇床转速 200-300）。注意：建议使用 LB 培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统的处理能力而降低质粒 DNA 的质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒 DNA 浓度降低。

2.用 1.5 mL 离心管收集 1-5 mL 过夜培养饱和菌液，室温 12,000×g 离心 1 分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。

3.第一次使用本试剂盒时，先将本试剂盒提供的全部 RNase A 溶液加入到质粒DNA 纯化溶液 A（简称溶液 A，下同）中，摇匀后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃ 保存。

4.加入 250 ?L 溶液 A 到第 2 步得到的细菌沉淀中，用枪头充分吹打使菌体重悬。注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完-全混匀。

5.加入 250 ?L 质粒 DNA 纯化溶液 B（下面简称溶液B，如果溶液 B 在低温放置产生沉淀，须 37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和颠倒 4-6 次混匀， 蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠。注意：千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒 DNA。

6.冰上放置不超过 5 分钟。注意：冰上放置不要超过 5 分钟，否则质粒 DNA 会有碱损伤。溶液 B 用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的碱，降低其效率。如果溶液 B 颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且跟厂家联系。

7.加入 350 ?L 冰上预冷的质粒 DNA 纯化溶液 C（下面简称溶液C），温和反复颠倒 4-6 次，溶液将变成无色，将有白色絮状沉淀产生。

8.冰上放置至少 5 分钟让质粒 DNA 复性。不能短于 5 分钟，一般 10 分钟。

9.12,000×g 离心 3 分钟，小心将上清液转移到新离心管中。由于此时的溶液比重较大，部分絮状物悬浮在上清液中属正常现象，吸取上清时避开这些悬浮物即可。如果此步的离心在 4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。

10.加入 0.6 mL 去蛋白溶液，充分震荡 2 分钟后常温 12，000×g 离心 2 分钟， 取水相（无色）到新离心管中，不要取有颜色的部分。

11.加等体积的质粒沉淀液，颠倒 30 秒混匀后室温 12,000×g 离心 10 分钟，质粒

DNA 将形成沉淀，弃上清。

12.加入 1 mL 的自备 75%乙醇，室温 12,000×g 离心 1 分钟，弃上清。

13.室温 12,000×g 离心 1 分钟，取出残留液体（约 50 ?L）。

14.室温短暂放置半分钟。

15.加入 DNA 洗脱液 50-100 ?L 重悬沉淀，即得质粒 DNA 溶液，可以直接用于后续实验。

选择我们的质粒 DNA 纯化试剂盒（沉淀法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！