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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Linker-Adapter PCR 是用限制性內(nèi)切酶酶切基因組DNA，產(chǎn)生 100-1500 bp的片段，然后在其兩端加上 Linker，最后用識(shí)別 Linker 的引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增的一種全基因組 DNA 擴(kuò)增技術(shù)。其原理示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，十分簡(jiǎn)單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.所有反應(yīng)一管式完成，不會(huì)有 DNA 的丟失。

3.適用于擴(kuò)增沒有降解的痕量樣品、激光微切樣品（Laser microdissection）、單細(xì)胞 DNA、單染色體或染色體片段。但不適合已經(jīng)降解的 DNA。降解的 DNA 可選用本公司的 RCA 法全基因組擴(kuò)增產(chǎn)品。

4.含熒光染料，可以實(shí)時(shí)監(jiān)控?cái)U(kuò)增反應(yīng)過(guò)程，不需要實(shí)驗(yàn)結(jié)束后再跑電泳，節(jié)約寶貴樣品（因?yàn)樾枰M(jìn)行全基因組擴(kuò)增的樣品都非常珍貴）。

5.可以將模板 DNA 擴(kuò)增上萬(wàn)倍。

6.適用于探針標(biāo)記，雜交，位點(diǎn)檢測(cè)。但由于 Taq DNA 聚合酶的突變率較高，不推薦后續(xù)用于高通量測(cè)序。如果需要測(cè)序則建議使用 RCA 法擴(kuò)增。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次 50 μL 體系的 LA-PCR 反應(yīng)。

8.全基因組擴(kuò)增試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 有效期為一年。

自備試劑

純化好的 DNA 模板、超純水。

使用方法：

1.如果是純化好的 DNA，則直接用在管中加入 4 μL DNA，0.5 μL 10×酶反應(yīng)液，然后直接進(jìn)入下表的加 0.5 μL MseI 內(nèi)切酶進(jìn)行酶切的步驟，后續(xù)步驟同。

2.如果是含蛋白質(zhì)的微量樣品、單個(gè)細(xì)胞，單個(gè)染色體或染色體片段，則按下表進(jìn)

進(jìn)行操作：

成分管 1

（樣本）管 2

（無(wú)模板對(duì)照）

待處理樣品不超過(guò) 3.5 μL-

10×酶反應(yīng)液0.5 μL0.5 μL

蛋白酶溶液0.5 μL0.5 μL

加自備超純水到 4.5 μL到 4.5 μL

42℃保溫 15 小時(shí)后 80℃10 分種

各加入 0.5 μL MseI 內(nèi)切酶，總體積為 5 μL

37℃保溫 3 小時(shí)后 65℃ 5 分種

再加入下列成分

引物 11.0 μL1.0 μL

引物 21.0 μL1.0 μL

超純水0.5 μL0.5 μL

10×酶反應(yīng)液0.5 μL0.5 μL

此時(shí)總體積為 8 μL。放 PCR 儀上，從 65℃降溫到 15℃，每

分鐘降低 1℃。然后再加入下列成分

ATP 溶液，10 mM1 μL1 μL

T4 DNA 連接酶1 μL1 μL

此時(shí)總體積為 10 μL。15℃保溫過(guò)夜。再加入下列成分

超純水14 μL14 μL

引物 21 μL1 μL

2×染料法 qPCR

MasterMix25 μL25 μL

按下列參數(shù)進(jìn)行 5 步式 PCR： 第一步：68℃3 分鐘。

第二步：（94℃ 40 秒，57℃ 30 秒，68℃ 1 分 30 秒，每增加 1 個(gè)循環(huán)加 1 秒）共 14 個(gè)循環(huán)。在 68℃采集 SYBR 通道的熒光信號(hào)。

第三步：（94℃ 40 秒，57℃ 30 秒，每增加 1 個(gè)循環(huán)加 1

秒，68℃ 1 分 45 秒，每增加 1 個(gè)循環(huán)加 1 秒）共 8 個(gè)循環(huán)。在 68℃采集 SYBR 通道的熒光信號(hào)。

第四步：（94℃ 40 秒，65℃ 30 秒，68℃ 1 分 53 秒，每增加 1 個(gè)循環(huán)加 1 秒）共 22 個(gè)循環(huán)。在 68℃采集 SYBR 通道的熒光信號(hào)。

第五步：68℃3 分鐘。

3.有擴(kuò)增的將有平緩的 S 曲線，無(wú)模板對(duì)照見沒有此曲線。

4.所得擴(kuò)增產(chǎn)物可以純化后用于各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)，包括再擴(kuò)增。

選擇我們的全基因組擴(kuò)增試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！