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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

無(wú)縫克隆是一種簡(jiǎn)單、快速、高效的 DNA 定向克隆技術(shù)，該技術(shù)突破傳統(tǒng)， 不依賴內(nèi)切酶和連接酶，不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制，利用同源重組的原理，可將任何 DNA 片段克隆至任何載體的任何位點(diǎn)。反應(yīng)及轉(zhuǎn)化時(shí)間短，陽(yáng)性率達(dá) 95%以上。此反應(yīng)的示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.簡(jiǎn)單、高效地定向克隆 DNA 片段。

2.可同時(shí)定向克隆兩個(gè)或多個(gè) DNA 片段。

3.不依賴內(nèi)切酶和連接酶，不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制。

4.省時(shí)，反應(yīng)時(shí)間加轉(zhuǎn)化時(shí)間短至 20 分鐘。

5.PCR 產(chǎn)物（僅有目的條帶、無(wú)非特異條帶和引物二聚體）可直接進(jìn)行重組反應(yīng)，無(wú)需純化。

6.本產(chǎn)品足夠 20 次 20μL 體系的無(wú)縫克隆。

7.無(wú)縫克隆試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

線性化載體、DNA 片段、感受態(tài)細(xì)胞、SOC 或 LB 培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿（含抗菌素和不含的）

使用方法：

一、線性化載體的制備：

可通過單酶切、雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法來(lái)制備。（如果線性化不徹-底，將會(huì)導(dǎo)致陰性克隆的產(chǎn)生，推薦使用雙酶切或 PCR 擴(kuò)增的方法。）

二、DNA 片段的制備：

1. DNA 片段可通過 PCR 擴(kuò)增或酶切的方法制備，PCR 擴(kuò)增片段無(wú)需純化即可用于重組反應(yīng)。

2.PCR 擴(kuò)增法引物設(shè)計(jì)原則：引物的 3’端必須包含 18-50 個(gè)能與模板 DNA 結(jié)合的堿基序列，以便 PCR 擴(kuò)增出目的 DNA 片段。引物的 5’端必須包含15-80 個(gè)與線性化載體末端同源的堿基序列，以便 PCR 擴(kuò)增片段能與線性化載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

三、重組反應(yīng)：

3.按照如下體系操作：

4.50℃反應(yīng) 20 分鐘，然后將離心管放置于冰上 2 分鐘。如當(dāng)天不進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)將連接產(chǎn)物放-20℃保存。

四、轉(zhuǎn)化：

5.取 4 μL 連接液至 50-100 μL 剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞中，輕輕混勻，冰浴 30分鐘。

6.42℃水浴熱激 90 秒。

7.立即放置于冰上靜置 5 分鐘。

8.加入 500 μL 無(wú)菌 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），37℃，200-250 rpm振蕩培養(yǎng) 45-60 分鐘。

9.吸取 200 μL 菌液涂板，為得到更多克隆，可先 4000 rpm 離心 3 分鐘，棄掉部分上清，用移液器輕吹菌體，至充分懸浮，取全部菌液涂板，然后 37℃ 培養(yǎng)過夜（12-16 小時(shí)）。

10.用菌落 PCR、直接測(cè)序或其他方法鑒定重組子。

選擇我們的無(wú)縫克隆試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！