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產(chǎn)品簡介：

對 dsDNA 進(jìn)行準(zhǔn)確定量是很多重要的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的前提。不同的定量方法有不同的線性范圍和檢測靈敏度，對干擾的屏蔽能力也各不相同。其中， OD260 測定法操作最-簡單，但靈敏度只有 5 μg/mL，不能屏蔽單鏈 DNA、RNA 和核苷酸的干擾。為此本公司開發(fā)了基于 Hoechst 33258 熒光染料的 dsDNA 定量產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶不需要單獨(dú)摸索最佳條件。

2.操作簡單，只需要將 Hoechst 33258 工作液與待測樣品混合即可。

3.徹-底屏蔽 RNA 的干擾，同樣濃度 RNA 產(chǎn)生的熒光不超過 DNA 的 1%，尤其適用于直接用細(xì)胞裂解液測定 DNA 濃度（此時(shí)有大量RNA 存在）。

4.能部分屏蔽單鏈 DNA 的干擾。Hoechst 33258 熒光染料與單鏈 DNA 結(jié)合時(shí)發(fā)出的熒光并不會與單鏈DNA 濃度成比例。

5.需要激發(fā)波長為 365 nm，發(fā)射波長為 458 nm 的熒光儀。

6.可選用比色皿檢測模式，也可選用多孔板檢測模式。

7.靈敏度比 OD260 測定法高 500 倍，為 10 ng/mL。

8.線性范圍為 10 ng/mL-10 μg/mL（相當(dāng)于 10 pg/μL-10 ng/μL）。

9.Hoechst 33258 染料對dsDNA 具有高度選擇性，主要識別AT 區(qū)。

10.提供dsDNA 定量對照，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。dsDNA 定量對照AT 含量為 59%。

11.本產(chǎn)品足夠 100 次 100 μL 體系的測定，每次用 10 μL 樣品。

12.DNA 濃度測定試劑盒（Hoechst 33258 法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期半年。

自備試劑

超純水，能檢測激發(fā)波長為 365 nm，發(fā)射波長為 458 nm 的熒光儀。

使用方法：

1.將 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品用 Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液稀釋成 1 mg/mL，此為工作液，放冰上待用。

2.打開儀器預(yù)熱 10-15 分鐘。

3.用超純水將 20×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液稀釋到 1×，用多少稀釋多少。

4.用 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液將本試劑盒提供的dsDNA 定量對照梯度稀釋成 1 mg/mL、100 μg/mL、10 μg/mL、1 μg/mL、100 ng/mL、10 ng/mL共六個(gè)濃度，各取 100 μL 到離心管中放常溫待用。

5.取 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液 100 μL 到離心管中作為空白對照。

6.對 N 個(gè)待測樣本，如果是待測 DNA 溶液，則取 10-100 μL 到離心管中，補(bǔ) 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液到總體積為 100 μL；如果是細(xì)胞裂解液，則稀釋細(xì)胞裂解液使其 SDS 的濃度不超過 0.02%。如果超過此濃度，將在下步會降低熒光讀數(shù)。

7.在上述 6+1+N 個(gè)離心管中各加 100 μL Hoechst 33258 染液，充分震蕩混合。

8.40℃放置 20 分鐘。

9.測定 458 nm 光吸收（激發(fā)波長為 365 nm）。

10.所有光吸收數(shù)值減去空白對照數(shù)值，然后根據(jù)此數(shù)值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再用 N 各樣本的數(shù)值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中推出檢測管中樣本的 DNA 濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算出稀釋前樣本中 DNA 的濃度。

選擇我們的DNA 濃度測定試劑盒（Hoechst 33258 法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！