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产品简介：

免DNA提取PCR试剂盒是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行 PCR 扩增的试剂盒。免 DNA 提取 PCR，即在传统 PCR 技术的基础上，免去 DNA 提取步骤。

规格及成分：

免 DNA 提取 PCR 试剂盒第一部分，常温运输和保存。

免 DNA 提取 PCR 试剂盒第二部分，低温运输，-20℃保存。

产品参数：

产品规格

400次

保存和运输

常温运输及保存，2×PCR MasterMix 需要低温运输，-20℃保存。有效期一年。

自备试剂：

自备PCR 引物，阳性 DNA 样品，超纯水。

使用方法：

1.首-次使用本制品时需要详细检查免 DNA 提取 PCR 溶液 A 和免 DNA 提取PCR 溶液B 是否有结晶析出。如果有需要 37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。

2.根据材料不同参考下表取少量样品到 1.5 mL 塑料离心管中。

3.注意：未列出的样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），组织使用量最好不要超过0.5 mg。

4.加入100 μL免DNA提取PCR溶液A，确保免DNA提取PCR溶液A完-全将样品淹埋。

5.用离心管专用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可；实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊（植物叶片的话，溶液的颜色将变成绿色）。如需更多研磨杵，可从我司另购。对棘手的样品，还可以增加95℃保温10～60分钟一步，待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实 体组织碎片不会影响后续试验。

6.加入100 μL免DNA提取PCR溶液B，震荡10秒混匀。

7.常温12000×g离心2分钟。

8.将上清液转移到一个干净的1.5 mL离心管中。如果不用，可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR，请直接进入下步。

9.简短振荡混匀后取样品裂解产物原液用超纯水进行梯度稀释（1E1-1E5）， 分别取5 μL直接进行30 μL体系的PCR扩增，选能检测到的梯度作为模板。如果有N个样品则设置N+3个PCR管，其中N个用于待检测样品，1个用于水的阴性对照，一个用于免DNA提取PCR溶液A和B混合液的阴性对照，另一个用于阳性DNA样品的阳性对照。30 μL体系的PCR反应体系如下：

成份N 个

样品管阴性对

照管 1阴性对

照管 2阳性

对照管

2×PCR MasterMix15 μL15 μL15 μL15 μL

细胞裂解液（来于上步）5 μL不加不加不加

免 DNA 提取 PCR 溶液 A 和 B

混合液

不加

不加

5 μL

不加

阳性 DNA 样品不加不加不加5 μL

自备PCR 引物 1（10 μM）1 μL1 μL1 μL1 μL

自备PCR 引物 2（10 μM）1 μL1 μL1 μL1 μL

补自备超纯水到30 μL30 μL30 μL30 μL

注意：裂解液体积最好不要超过 PCR 体积的 1/10。如果需要增加模板的加入量，则 PCR 体系应该相应的增加。如果加入 5 μL 裂解液，则可以使用 50 μL 的PCR 体系。

10.放入 PCR 仪中进行 PCR，PCR 参数需要根据引物 Tm 值和靶分子长度等参数设置。一般不低于 35 次循环。

11.PCR 结束后取 5～10 μL 直接上样电泳（本产品不需要上样液），红色染

料电泳速度相当于 50 bp DNA 片段。

选择我们的免DNA提取PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！