斑馬魚(yú)氫ATP酶(H+-ATP)elisa檢測(cè)試劑盒 說(shuō)明書(shū) 的標(biāo)準(zhǔn)操作說(shuō)明概要，供參考。具體步驟請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

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一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 試劑與材料

   • 試劑盒（含標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體、酶標(biāo)板、底物A/B、終止液、洗滌液、封板膜等）。
   • 樣本（血清、血漿、組織勻漿液等）。
   • 37℃恒溫箱、離心機(jī)、移液器、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板）、酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）。

2. 樣本處理

   • 血清/血漿：離心分離（3000×g，10分鐘），取上清液。
   • 組織勻漿：勻漿后離心（5000×g，10分鐘），取上清。
   • 樣本需避免反復(fù)凍融，4℃短期保存或-80℃長(zhǎng)期保存。

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二、操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品配制

• 將標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉用稀釋液復(fù)溶，按說(shuō)明書(shū)梯度稀釋。

2. 加樣

• 每孔加入100 μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)空白孔。
• 覆蓋封板膜，37℃孵育90分鐘。

3. 洗滌

• 棄去孔內(nèi)液體，每孔加350 μL洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)3次。拍干殘留液體。

4. 檢測(cè)抗體孵育

• 每孔加入100 μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘。
• 洗滌3次（同步驟3）。

5. 顯色反應(yīng)

• 每孔加入100 μL酶結(jié)合物（HRP標(biāo)記），37℃避光孵育30分鐘。
• 洗滌5次（chedi去除洗滌液）。

6. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

• 每孔加50 μL終止液，15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。

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三、結(jié)果計(jì)算

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
   • 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線（常用Logistic四參數(shù)模型）。
2. 樣本濃度計(jì)算
   • 根據(jù)樣本OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計(jì)算LPA濃度。

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四、注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格避免交叉污染，加樣時(shí)更換槍頭。
2. 洗滌步驟需chedi，避免殘留影響信號(hào)。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品和試劑需恢復(fù)至室溫后再使用。
4. 終止液具有腐蝕性，操作時(shí)需戴手套。
5. 若OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，需調(diào)整樣本稀釋比例。

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