诺博莱德 Caspase-4活性检测试剂盒Caspase-4 Activity Assay Kit

Caspase-4活性检测试剂盒 细胞凋亡检测方法

产品货号：BC1628

产品名称：Caspase-4活性检测试剂盒Caspase-4 Activity Assay Kit

英文名称：Caspase-4 Activity Assay Kit

产品规格：50T/100T/20T

产品简介：

检测方法：比色法 Colorimetric

储存条件：Store at -20℃，6 months

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderBC1628 Caspase-4活性检测试剂盒Caspase-4 Activity Assay Kit是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-4可以和 Apaf-1相互作用，并参与细胞se素c导致的Caspase-3激活，也可以和 caspase-14 相互作用。试剂盒测定原理基于Caspase-4特异水解其多肽底物 AC-LEVD-pNA,释放出游离的硝基苯胺 pNA，后者呈黄色在 405nm 具有最大吸收峰，采用可见光光度比色法测定。适用于检测哺乳动物组织、细胞 Caspase-1活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、100uL 玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、培养细胞:先收集细胞到离心管，离心后弃上清;按照细胞数量(约106个)加100L试剂二(若裂解不充1.分可提高至 150-200μL)，震荡重悬沉淀，置冰上静置15 min，15000g4℃离心 10-15min，取上清置冰上待测。

2、组织按照组织质量(g):试剂二体积(mL)为1:5-10的比例(建议称取约01g组织，加入1mL 试剂二)冰浴研磨或充分剪碎，置冰上静置15min，4℃，15000g离心10-15min，取上清置冰上待测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至405nm，分光光度计蒸馏水调零。2、标准溶液的稀释:将5mmolL pNA 标准品用标准品稀释液稀释至 200、100、50、25、12.5、0umolL 的标准溶液备用。

注意事项:

1、由于试剂二中含有还原剂(DTT)，建议将样本用水稀释2倍后，用Bradford法测定蛋白浓度，以降低 DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。

2、Caspase 活性测定值低最常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，2并非剂量越大时间越长 Caspase 活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测最佳的观察点。

3、所测样本的值高于标准曲线上xian时，可用试剂二稀释样本后重新测定。

4、盖紧 96孔板盖子并用封口膜密封。37℃孵育，肉眼可见颜色变黄时的 OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。

Caspase-4活性检测试剂盒 细胞凋亡检测方法

产品订购信息

BC1628 Caspase-4活性检测试剂盒Caspase-4 Activity Assay Kit 50T/100T/20T