诺博莱德 Tuner(DE3)感受态细胞

Tuner(DE3)感受态细胞   载体构建

产品货号：C9938

产品名称：Tuner(DE3)感受态细胞

产品规格：10×100μl

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9938 Tuner(DE3)感受态细胞为 LacYZ 突变型 BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用 IPTG 的加入量来精准地控制重组蛋白的表达量，与pET 系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到高表达水平进行有效调控（使用低浓度的IPTG 诱导重组蛋白低水平表达时，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生物活性）。该菌株含有λ噬菌体DE3区，可以表达T7RNA 聚合酶。Tuner(DE3)菌株属于B菌株，lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率达107cfu/μgDNA。

基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-) gal dcmlacY1 (DE3)

菌株抗性：对氨苄青mei素、卡那mei素、氯mei素和四环素敏感。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

（以氨苄青mei素抗性的 pET 质粒为例）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μL含有1-100ng的质粒DNA 到细胞中，用手指bo打管底，轻轻混匀。

2. 冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3. 42℃热击60秒钟，不要晃动。

4. 冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5. 加入500μL的室温的SOC或LB培养基。

6. 置于37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养60分钟。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青mei素抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板37℃培养12-24 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留100μL左右的液体，用200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落）。

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到*低。

Tuner(DE3)感受态细胞   载体构建

产品订购信息

C9938 Tuner(DE3)感受态细胞  10×100μl