诺博莱德 RNAzol Plus Reagent  核酸提取

免氯仿总 RNA 提取试剂RNAzol Plus Reagent (NO Chloroform) 

目录号：91021

产品内容

自备试剂

异丙醇、RNase-Free H2O、75%乙醇（使用 RNase-Free H2O 配制）

保存条件

在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2 ~ 8℃。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介

与传统 Trizol 提取方法相比，RNAzol Plus 不需要使用氯仿进行分层，操作更简单，且全程可在常温进行。

RNAzol Plus Reagent是Trizol的升级版——免氯仿，具有和Trizol类似的适用范围，可以从动物组织、培养细胞、植物材料、真菌、细菌及各种微生物等样品中提取总RNA。

本产品提取的 RNA 没有 DNA 和蛋白的污染，可以直接用于 cDNA 克隆、RT-qPCR 检测、mRNA 纯化、体外翻译、Northern blotting 杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

RNAzol Plus 既可用于小量样本（50-100mg 组织、5×10⁶ 细胞）的总RNA 提取，又可用于大量样本（≥1g组织、≥10⁷细胞）的总RNA提取。

注意事项

1) RNA在裂解液RNAzol Plus中时不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的吸头，建议直接购买GeneBetter商品化的RNase-Free的吸头。研钵用水彻di洗净，在150℃烘干即可。

2) 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。

3) 样品加入裂解液RNAzol Plus匀浆后，样品可在–80℃保存一个月以上。

4) 取 RNA 样本时，把新鲜组织样本浸入 RNAsafe (RNA样品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。

操作步骤

提示：所有离心步骤均需要在室温（15 ~37℃）下进行，提取效果更佳！

1. 材料处理：

a．植物组织（植物、真菌）：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织jian碎后在 RNAzol Plus 中研磨。每20-50mg组织加0.5ml裂解液RNAzol Plus，剧烈涡旋震荡20 sec，混匀。

b．动物组织：取新鲜或-70℃冻存组织，每15-50mg 组织加 0.5ml裂解液 RNAzol Plus，用匀浆仪进行匀浆处理?；蚪橹谝旱心ニ楹蠹尤隦NAzol Plus，剧烈涡旋震荡 20 sec，混匀。

c． 单层贴壁培养细胞：吸去培养液，加入适量裂解液RNAzol Plus，每10 cm² 加 0.5ml 裂解液RNAzol Plus，（例如：3.5cm培养皿加0.5ml RNAzol Plus）, 用移液器反复吹打几次，裂解细胞。

d．细胞悬液（动物细胞、植物、酵母、细菌）：离心收集细胞，弃上清，每5×10⁶ 个细胞加0.5ml裂解液RNAzol Plus。加裂解液 RNAzol Plus 前不要洗涤细胞，以免降解 mRNA。

e．血液（血液、血浆、血清）：每 200 ul（低于 200 ul 时，可用 RNase-free H2O 补足）血液、血浆、血清等液体样本，加入 0.5 ml RNAzol Plus后，剧烈涡旋震混匀 。

2. 加入200 ul RNase-free H2O(RNAzol Plus 体积的0.4倍)，盖好管盖，剧烈振荡混匀，室温放置5min。

3. 室温 12,000 rpm离心15 min，样品将分为二层，下层沉淀和上层水相，RNA主要在上层水相(约630 ul)中，转移500 ul水相到一新的离心管中。

注意：提取微量样本时，如果不出现分层，则转移全部上清。

4. 在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，颠倒混匀，室温放置 10 min。

5. 室温 12,000 rpm 离心 10 min，通?？梢钥吹桨咨恋?，弃上清。

（离心前 RNA 沉淀通常是看不见的，离心后在管侧或管底成薄片状沉淀。）

6. 加入 1ml 75%乙醇洗涤沉淀，涡旋震荡 15 sec,让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

7. 室温 12,000 rpm 离心 3 分钟，倒出上清，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液体短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

8. 可选步骤：重复步骤6和7一次，可增加纯度。

9. 室温放置约1分钟，晾干。加入50~100 ul的RNase-Free ddH2O，吹打混匀，充分溶解RNA。

10. 得到的RNA，可立即用于下游实验，或于-70℃保存，防止降解。

相关产品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)

诺博莱德 RNAzol Plus Reagent  核酸提取