天dong酰胺合成酶(asparagine synthetase，AS)活性测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

天dong酰胺合成酶活性测定试剂盒 氮代谢

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

天dong酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷an酞胺的氨基向天冬an酸转移。当植物处于氨毒时天an酞胺的形成是一种解毒反应。

测定原理：

AS 催化L-天dong酰胺水解成 L-天冬an酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

组成：

自备仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1ml 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提?。?/span>

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。

2、样品测定（在 EP 中加入下列试剂）：

混匀，37℃水浴 1 小时

混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在EP 管中加入下列试剂

混匀，室温静置 15min，420nm 处读取吸光值A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管

注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。

计算：

标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x 为标准品浓度（μg/ml），y 为吸光值 A。。 1、血清（浆）AS 活性

单位定义：每ml 血清（浆）每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。

AS（μg/h/ml）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷V 样÷T=31.722×(ΔA+0.0434)

2、组织、细菌或细胞中 AS 活力的计算:

按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。

AS 活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr

按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。

AS 活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W

按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1μg 氨定义为一个酶活力单位。

AS 活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)

T：反应时间，1h； V 反总：反应体系总体积：0.525ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.025ml；V样总：提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数， 500 万

天dong酰胺合成酶活性测定试剂盒 氮代谢