肌酸ji酶（Creatine Kinase, CK）测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

肌酸ji酶测定试剂盒 辅酶Ⅱ

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与 ATP 之间的转磷?；?/span>应，在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。

测定原理：

CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和ATP，己糖激酶催化 ATP 与葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化 6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。

组成：

试剂一：粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 15ml 蒸馏水溶解。

工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以 1:1 混合。使用前 37℃温育 2min。

自备仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 ml 石英比色皿和蒸馏水。

粗酶液提取：

组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml

提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。

血清样本：直接测定。

测定步骤：

紫外分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

在 1 ml 石英比色皿中加入 200μl 样本和 300μl 蒸馏水，最后加入 500μl 工作液，立即混匀，37℃下测定初始吸光值A1 与 1min 后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。

CK 活性计算公式

1、按组织蛋白含量计算

酶活定义：37℃，pH7.0 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性（nmol/min / mg prot）=

2、按组织样本质量计算：

?A?? d

×V 反总÷(V 样×Cpr)= 804×△A÷Cpr

酶活定义：37℃，pH7.0 时，每克样品 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性（nmol/min /g 鲜重）=

按血清计算：

?A

?? d

×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 804×△A÷W

酶活定义：37℃，pH7.0 时，每升血清 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

CK 活性（nmol/min /L）=

?A

?? d

×V 反总÷V 样= 804×△A

?：NADPH 摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.2ml；T，反应时间，1min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g

注意事项

配制好的工作液 4℃稳定 7 天，请配制后尽快使用。

血清的CK 不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定 24h。

样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。

OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。

肌酸ji酶测定试剂盒 辅酶Ⅱ