诺博莱德 NP-40裂解液 样本裂解采集与制备

产品简介：

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如 Triton、SDS、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于 PAGE 电泳、 Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation ， IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 主要由 Tris-HCl、NaCl、NP-40 以及 sodium pyropho-sphate，β-glycerophosphate，sodium  fluoride,  EDTA 等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40  Lysis  Buffer 得到的蛋白，可以用 BCA 蛋白定量试剂盒和 Bradford 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。 

产品组成：

诺博莱德 NP-40裂解液 样本裂解采集与制备

操作步骤(仅供参考)：

(一)贴壁培养细胞

1、取 NP-40 Lysis Buffer  置于室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40  Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3s内，细胞就会被裂解。

4、10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、取 NP-40  Lysis  Buffer  置于室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

2、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer  。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

3、10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

4、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1、取 NP-40  Lysis  Buffer  置于室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mm。把组zhi剪切成细小的碎片，越小越好。

  2、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控

制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。

3、按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 30～60min。

4、 步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的 NP-40 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。

  5、10000～12000g，4℃离心 5～15min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

  6、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：

1、在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

3、在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

  5、溶解 NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

6、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。