LLC-OVA 小鼠Lewis肺癌细胞OVA转染

背景描述

Bertram 等人于 1980 年从 C57BL 小鼠的肺中建立的细胞系，该细胞带有原发性 Lewis 肺癌的植入所致的肿瘤，被广泛用作转移的模型，可用于研究癌症化学治疗剂的机制。抗原表达：H-2b。这些细胞对 1,3-双-(2-氯乙基)-1-亚 硝 ji 脲具有抗性，但对甲氨蝶呤敏感。据报道，这些细胞具有高度的致瘤性，但在小鼠中的转移性较弱。细胞在烧瓶中形成多层，实际上并没有汇合。测试并发现ectromelia 病毒（鼠痘）呈阴性。

培养条件

准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%+10ug/ml puro。

气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

细胞特征

1）来源：国家资源库

2)  形态：半贴壁生长，混合形态，有上皮细胞样，松散贴壁或悬浮有梭形、圆形等细胞形态。

冻存条件

无血清冻存液

细胞检测

不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

供应限制

仅供科研使用

运输方式

常温或冻存（T25瓶或者1mL冻存管包装）

注意事项

如果细胞为稳定转染的细胞，随细胞传代次数的增加，其荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。建议收到细胞后至少传 3 代，冻存留种后再进行筛选，常规实验需求不是特别强度高的前面 10 代左右无需筛选。初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为 5ug/ml 嘌呤霉素的专用培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含 10ug/ml嘌呤霉素的专用培养基继续筛选，以此类推，至*高药物浓度为 20ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于 60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约 80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入 20ug/ml 嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药专用培养基正常培养。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)半贴细胞和贴壁不牢（悬?。┫赴?/span>T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用专用培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL专用培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，专用培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml专用培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的专用培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的专用培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。 

上海语纯生物科技有限公司，是由具有*生命科学、生物技术背景人员共同创办的技术企业。公司专注于原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品，为高校、食品、医药、生物研究等领域提供相关技术支持和服务。

公司自成立以来通过不断地科技创新，产品研发，已为客户提供定制化细胞产品以及完整的细胞培养解决方案，通过积极地探索、研发、深化和丰富产品，目前基础培养基产品种类多达200多种，细胞系300多种，原代细胞接近600种。我们始终以“发展科学技术，关爱公众生命健康"为动力，通过技术创新，广泛吸纳高科技人才，不断完善产品体系、丰富产品链，积极拓展市场，扩充应用领域，，建立了具有市场竞争力的“语纯"品牌。

注意事项

1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩操作；

2、为保持本产品的优良使用效果，请务必按照建议的储存条件进行保存；

3、本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。

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