猪新发冠状病毒N蛋白，猪新发冠状蛋白，猪新发冠状病毒抗原

猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCo V)是一种新兴冠状病毒,可引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成巨大损失。PDCo V主要编码的4个结构蛋白是:纤突蛋白(spike,S)、核衣壳蛋白(nucleocapsid,N)、膜糖蛋白(membrane,M)、小膜蛋白(envelope,E)。其中,N蛋白在病毒RNA复制和产生过程中起重要作用,表达量大、保守性强,常作为其他冠状病毒检测病毒抗体的诊断抗原。决定抗原特异性的分子基础是抗原表位,通过对其进行研究,有利于进一步设计兼具有免疫活性和中和活性的多肽、新型诊断试剂和新型疫苗分子。鉴于此,本研究通过制备PDCo V N蛋白单克隆抗体并对抗原表位进行筛选与鉴定,为PDCo V诊断方法和新型疫苗的研究奠定基础。为了获取PDCo V N基因重组蛋白,本试验分别构建了PDCo V NH毒株的N基因的p ET-32a和p GEX-6p-1原核表达载体,并分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,利用浓度为1 m M的IPTG对重组菌进行诱导表达,进一步对表达的PDCo V重组N蛋白进行纯化与鉴定。结果显示,以PDCo V NH毒株病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出约1 029 bp的N基因,与预期大小相符;SDS-PAGE电泳验证,结果显示,PDCo V N基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得成功表达,表达的重组N蛋白的分子量分别为56 k Da和64 k Da,与预期大小相符;Western blot结果中,纯化后的蛋白可以特异性的与PDCo V阳性血清发生反应,说明其抗原性良好。以表达并纯化得到的His-PDCo V-N为免疫原,免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,共制备得到17株能特异性稳定分泌抗PDCo V N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G6、1F8、1E10、2G5、3A7、3F9、3E12、5D11、7B2、7E6、7G6、7F10、8E2、8D4、8E8、9G1、9G11?？固逖抢嗉ㄏ允?3E12和9G11细胞株分泌的抗体亚类为Ig G2b型,其余15株均为Ig G1型,轻链均为κ链。

品牌：PhyCell/费雪
规格：0.1mg,0.5mg,1mg
该抗原可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。
蛋白载体:牛血清白蛋白/卵清白蛋白/匙孔血蓝蛋白BSA/OVA/KLH
物理性状：液体，避免反复冻融
来 源:Balb/c 小鼠
免疫层析效价： 1:40以上，偶联比大于1:60
蛋白浓度：＞1mg/ml，具体视批次而定
缓冲液：0.01M PBS PH7.4无防腐剂
储存条件：-20℃以下
稳 定 性： 冻融一次复检合格，有效期三年
本产品仅供研究使用，不适用于人类、治疗或诊断应用。