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1、無菌操作方式開啟凍干菌種管，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液，如細菌選擇營養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數次，使菌種融化分散。取含 5.0mL～10.0mL相應培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液，使用恒溫培養(yǎng)箱在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h），此為第1代培養(yǎng)物。

2、接種環(huán)取第 1 代培養(yǎng)物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h），此為第2代培養(yǎng)物。。

3、取第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基平板），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h），此為第3 代培養(yǎng)物。

4、取第 3 代培養(yǎng)物，接種于相應培養(yǎng)基斜面，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間，此為第4 代培養(yǎng)物。

5、按上述方法培養(yǎng)至所需代數，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數及傳代日期等基本信息。