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荧光定量PCR仪的操作步骤和保养措施
阅读：949 发布时间：2024-12-10
荧光定量PCR仪的核心在于利用荧光信号来实时监测PCR过程中DNA或RNA样本的扩增情况，从而实现对目标基因的精确定量分析。在荧光定量PCR中，首先需要将待测样本与特异性引物、DNA聚合酶以及荧光基团或荧光标记的探针混合，形成一个反应体系。然后，通过设定特定的PCR程序，如退火温度、延伸时间等，使得DNA在PCR仪中进行扩增。在PCR反应过程中，每当一个DNA被扩增时，与之结合的荧光基团或探针就会发出荧光信号。荧光定量PCR仪通过高灵敏度的荧光检测系统，实时收集并分析这些荧光信号，将其转化为数字信号，从而精确地反映出PCR产物的生成量。
一、操作步骤
打开电脑和荧光定量PCR仪的软件，设置PCR仪各通道的光电倍增器(PMT)电压。
将需要扩增的样品模板、引物、探针和内参照荧光探针分别加入到样品孔和试剂孔中。
加入PCR扩增试剂，包括缓冲液、引物、探针和内参照荧光探针。
启动PCR扩增仪，设定循环参数，包括预变性、变性、复性、延伸和荧光检测条件。
在每个循环中，加入相应的预变性液、复性液、延伸液和检测液，并维持一定的时间。
每次循环结束后，PCR仪自动收集信号并进行数据分析。
经过多次循环后，PCR仪将自动停止运行并输出结果。
二、维护保养
仪器外表应定期用软布加少数清水擦洗，清洗后将仪器擦干。若有试剂泄漏在仪器外表，应使用软布加70%酒精擦洗洁净。
反应孔应定期清洁，一般3个月一次，可用吹气球轻轻吹拭。为了防止尘土进入反应孔，仪器不使用时，应关闭滑盖。若有试剂进入样本孔内，应使用无尘软布加70%酒精擦洗洁净。
不要频频开关仪器，两次开关间隔时间不得低于30秒。试验结束后不要当即关闭电源，应待机10分钟后再关闭电源。
应使用原厂商供应的电源线和通讯线，禁止在仪器上进行沸水浴或低温保温(如4℃)。
仪器装有两个10A保险丝，用以?；ひ瞧?。当保险丝发生损坏后，用户应按说明书中的方法替换保险丝。