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细胞名称：U251MG瘤细胞人类星形胶质细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

细胞收到后处理

培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO₂的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的培养基，另外一瓶用自己配的培养基，以便进行对比培养）

培养前的工作准备充分

包括耗材的处理、试剂的配置，无菌检验等等。

玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿（细胞瓶、装营养液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干净（注意死角），然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗 10 遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。

无菌检验。主要采用过滤除菌：如抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠等。有些可以采用高压灭菌，如 PBS、D-Hank's等。

试剂分装保存

包括营养液、血清等。

血清特别重要。血清必须贮存于 –20℃，如果一次无法用完一瓶，可将 40～50ml 分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。（一般情况下不影响细胞培养）

瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

热灭活是指 56℃，30 分钟加热已解冻之血清。水浴锅升到 56℃后，将血清放入，待温度升高到 56℃ 后计时，一般 5 分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清（包括不同批次）对细胞的影响。

注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入消化液1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

YS972CBeta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛Beta细胞

YS973CC17.2小鼠神经干细胞

YS974CCT26小鼠结肠癌细胞

YS975CE14小鼠胚胎干细胞

YS976CEL-4小鼠淋巴瘤细胞

YS977CHPT-8小鼠饲养层上皮细胞

YS978CHT22小鼠海马神经元细胞

YS979CID8小鼠卵巢上皮癌细胞

YS980CLTPA小鼠胰腺癌细胞

YS981CMB49小鼠膀胱癌细胞

YS982CMC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞

YS983CMEF小鼠胚胎成纤维细胞

YS984CMEF(C处理)小鼠胚胎成纤维细胞

YS985CMFC小鼠前胃癌细胞

YS986CNCTCclone1469小鼠肝上皮细胞

YS987CP388小鼠白血病细胞

YS989CRENCA小鼠肾癌细胞

YS990CRGC-5小鼠视网膜神经节细胞

YS991C小鼠杂交瘤SDOW-17

YS992CSOX1-GFP小鼠胚胎干细胞

YS993CSp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞

YS994CSV40-MES-13小鼠肾小球系膜细胞

YS995CSVEC4-10小鼠淋巴结内皮细胞

YS996CU14小鼠子宫颈癌细胞

YS997CMC38小鼠结肠癌细胞

YS998CSTC-1小鼠小肠内分泌细胞

YS999CBRL-3A大鼠肝细胞

YS1000CC6大鼠脑胶质瘤细胞

YS1001CCFSC-8B大鼠肝星形细胞

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