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常達恩生物科技(上海)有限公司
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常達恩推薦-大鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)elisa檢測試劑盒

時間:2025/2/21閱讀:342
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使用目的:

本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本大鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)水平。用純化的大鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品大鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品(320pg/ml

0.5ml×1

3

標(biāo)包被

12孔×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

160pg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

80pg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40pg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20pg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10pg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

常達恩推薦-大鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)elisa檢測試劑盒


計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。



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